高效液相色谱实验室良好规范.pdfVIP

1依利特之页土 、十一十一十一十 一+一十一十洲 高效液相色谱实验室的良好规范 G《LP) I 溶剂的准备 正确准备溶剂对于高效液相色谱 (HPLC)试验是非常重要的，它能有效地避免鬼峰、降低基线噪声，从而提高分析能力。 1.1 溶剂质f HPLC试验均应使用高纯度的溶刘,HPLC级纯度的溶剂比分析级(AR)溶剂的纯度更高，所以稍贵一些。但是使用 HPLC级溶剂一般不会产生鬼峰，而使用AR级溶剂可能会由于杂质的存在导致出现鬼峰 要保证配制流动相用水的纯度足够高。因为去离子水通常含一些有机化合物，因此不推荐用于HPLC分析。常用的超纯 水(18Mfgcm)是去离子水通过离子交换处理得到，现代的水净化装置可以大量生产这种纯水，HPLC级纯水也可以从溶剂 经销商处购买。 注意:不要把HPLC纯水放在塑料瓶中，因为塑料中的添加剂可能会进人到水中造成污染。最好用玻璃瓶储存超纯水。 1.2 缓冲溶液 缓冲溶液的储存应有一定的时间限制，药典或相关资料对此都有要求。所有的缓冲溶液都应现用现配，以确保不会因为 缓冲溶液储存时间过长而使流动相pH发生变化，同时也可避免生长微生物。pH的变化和微生物的生长都有可能影响色谱 分离的效果。 商品缓冲溶液中可能包含硫代硫酸钠等稳定剂，这些稳定剂的存在可能会影响缓冲溶液的光学和色谱性能，因此，比较 理想的是购买不含稳定剂的溶剂。注意:重复使用的容器很容易被污染，因此推荐用小容量容器装溶剂。 1.3 过滤 理想情况下，所有溶剂都要通过0.45Wm滤膜过滤后再使用，这样能够有效防止由于微粒存在导致流路管线堵塞。过滤 后应把溶剂放在密封容器中，以防止被重新污染。过滤后的溶剂既可用于色谱分析，也可用于清洗诸如泵头、柱塞杆、单向阀 和密封圈等仪器部件，最大程度地清洗好这些部件能保证系统性能良好。 1.4 脱气 ， 在流动相进人HPLC系统之前应首先脱气。没有脱气的流动相进人到高压系统产生的气泡会导致系统不稳、出现鬼峰等 问题。从溶液中排除气泡的方法主要有:氦气脱气、超声波脱气和真空脱气。氦气或其他低溶解度气体是脱气的有效方法; 在线连续脱气可以防止空气重新溶解在溶剂中 注意:确保溶剂瓶上有孔，与大气相通，以防止溶剂瓶内部产生负压。 2 溶剂的使用 2.1 仪器 所有流路上都应装过滤器，以防止微粒进人系统。仪器不使用时，应把过滤器浸人到50%乙睛水溶液中，以防止微生物 的生长和污染物进人到过滤器中。 ， 流路管线应清洁通畅，且不存在硬性弯曲部分。 储液瓶应尽可能与仪器处于相同高度，且应高于泵的人口。流路管线应长度合适，保证在线过滤器达到储液瓶底部。 注意 在做分析试验之前，应计算好总共需要多少流动相，以便配制足够的流动相并装在合适的容器中。流动相不足会 造成系统抽干并充满空气。如果该类情况发生，需要用新配制的流动相重新冲洗系统并使基线平稳 2.2 流动相特性 除非HPLC系统和色谱柱能够耐受，一般不要使用强酸或强碱溶液。因为pH过高或过低可能会损害密封圈和柱塞杆 如有疑问，使用之前最好与色谱柱或仪器经销商联系，了解清楚相关事项。 水含量较高的流动相中容易生长微生物，因此这类流动相比纯有机溶剂流动相更易出现问题。同时还应注意使用水含 量较高的流动相时色谱柱使用方面的限制，因为传统的烷基键合固定相在流动相中有机溶剂的含量低于5%以下时容易发生 碳链断裂。一些新型键合固定相可以在以纯水为流动相的条件下使用。 为了避免使用含水流动相时系统中可能生成微生物，建议每隔48h左右用纯有机溶剂冲洗HPLC系统和色谱柱，以清除 所生长的微生物。此外，加人少量叠氮钠也是抑制纯水相中微生物生长的有效方法，但是要注意它的剧毒性。 注意:不要长时间(例如整个假期)将色谱柱和HPLC系统充满水或缓冲液，要经常用至少含20%的有机溶剂冲洗系统。 大连依利特分析仪器有限公司张庆合，李 彤 编译 (来完待续)