棉铃虫组织蛋白酶B组织分布和合成部位的研究.pdfVIP

维普资讯 动 物 学 研 究 2001．Jun．22 (3)：242—245 CN53——1040／Q ISSN0254——5853 ZooDgicatResearch 棉铃虫组织蛋 白酶 B组织分布与合成部位的研究 徐夏莲 赵小凡① 王金星 东上学生命科学学院生物系 济南 250t00 关键词 ：棉钵虫：组织蛋 白酶 B；免疫印迹 Northsm Blot 中图分类号：Q96942 文献标识码：A 文章编号：0254 5853(2001)03 0242 04 蛋 白酶是指裂解肽链的所有酶类 ，根据作用位 位进行 了研究，现报道如下 苣的催化基团将蛋 白酶分为4大类 ，即丝氦酸蛋 白 1 材料与方法 酶 、半胱氨酸蛋 白酶 (CvsteinePa)teinases，CP)、天冬 氨酸蛋 白酶和金属蛋 白酶。每一大类又包括多种不 1．1 材 料 同的蛋白酶 ，其中半胱氨酸蛋 白酶是一类细胞 内蛋 1．1．1 昆虫 棉铃虫 (Hefirccvrpaarmigern1由本 白酶 ，包括组织蛋白酶 B、L、H、N、S、T等 ，其活性 中 实验室饲养，幼虫为正常取食六龄中期幼虫，雌蛹 心含有活性必需的半胱氨酸残基，细胞内高度 的还 在4℃短期保存 ，雌 、雄成虫羽化后饲以5％蔗糖 原环境对 Ef]／的作用非常重要(_rurk＆Bobt，1991)一 水 ，24h后取脂肪体和卵巢 取材时各取 3 以消 蛋白酶参与多种生理 、病理性蛋 白水解 ，在昆虫中的 除个体差异 分市和功能也有报道 ，如蚊子卵中含有组织蛋白酶 1．1．2 试剂与设备 羊抗兔 一HRP为北京鼎国生 B，参 与胚胎发育过程卵黄蛋白水解 ，其合成部位为 物公司产品；硝酸纤维素膜为Cole．parmar公司产品 脂肪体 (Choetaf．，1999)；玉米象鼻虫 (Sitophifus (美 国)；RNA提取 试剂盒 (RNA IsolationKit)为 。∞mn／s)在消化器官和生殖器官中含有组织蛋 白酶 TaKaRa公司产品 (日本)；DigRNALabelingKit及 I，在食物消化和胚胎发育过程 中起着重要作用 Anti-DigPhosphataseAP均为 BoehringerMannheim (MatsLtntotoelat．，1997)。 公司产品(德国)；标准 RNA(RNAMarker)为美国 已有的研究表明棉铃虫卵内含有半胱氨酸蛋自 AMRESCO公司产 品；杂交炉为国产 RobbinsScien． 酶 ，可能在胚胎发育过程中水解卵黄蛋 白供给胚胎 tificModel2000；实验所用其他试剂均为国产分析纯 发育 ，经氨基酸序列分析鉴定为组织蛋 白酶 B，关 产 品。 于该酶的性质及纯化已有报道 (赵小凡等 ，l998)， 】．2 方 法 但对该酶在棉铃虫生长发育阶段的组织分布与合成 1．2．1 棉铃虫组织蛋 白酶 B纯化 根据 Zha0 部位的研究 尚属空 白。进 一步研究该蛋白酶的分布 ． (1998)方法进行。 与合成部位可以阐明该蛋白酶在棉铃虫体内的分布 1．2．2 抗血清制备 取健康雄性家兔，每周以7O 与功能，为新型杀虫剂设计提供新靶标。我们利用 ～ 10o g蛋 白酶加福 氏完全佐剂背部皮下分点注 纯化的棉铃虫组织蛋 白酶 B制备了抗血清，并根 射，3周后加强注射，即去掉福 氏完全佐剂，从耳 据该蛋白酶基 因 (GeneBmlkAF222788)合成 r探 缘静脉注射抗原；3周后取血清用双向免疫扩散法 针，对棉铃虫组织蛋 白酶 B的组织分布与合成部 (Ouchterlony＆Nilsson，1978)检查抗血清滴度 ． 收稿 日期