几种电子显微镜植物样品的制备技术.pdfVIP

第 21 卷 第 2 期 电 　子 　显 　微 　学 　报 Vol21 ,No2 2002 年 4 月 Journal of Chinese Electron Microscopy Society 20024 ( ) 文章编号 2002 几种扫描电子显微镜植物样品的制备技术 闭志强,蔡炳华 ,梁世春 (广西省农业科学院中心实验室 ,广西 南宁 530007) 摘 　要 : 介绍几种生物样品的扫描电镜制样技术。这些技术操作简单 ,快速且实用。 关键词 : 扫描电镜 ; 临界点干燥 ; 果胶酶 ; 花粉 中图分类号: Q336 　　文献标识码 : A ( ) 　　随着扫描电镜在各学科领域的广泛应用 ,其涉 二醛 01molL 磷酸缓冲液配制 pH7 2 固定 2 h ,用 及的样品种类日趋繁多 , 因此需要不断地探索新的 缓冲液漂洗 ,1 %锇酸固定 l h , 用缓冲液漂洗 , 经 ( 制样方法。本文报道我们建立的几种生物样品扫描 70 % 、85 % 、95 % 、100 %、100 %逐级丙酮脱水 每级 ( ) 电镜特殊制样技术及获得的几张显微照片 图 1～ 15～20min ,过渡到醋酸异戊酯 ,经二氧化碳临界点 5) 。 干燥 ,镀金后电镜观察 ,可见花粉粒形态饱满、结构 清晰。 1 　野生山楂品种资源分类鉴定扫描电 22 　花粉粒剥壳内部结构观察制样法 镜制样技术 为了给花粉分类鉴定提供更多的分析依据 ,我 　　本实验目的是利用扫描电镜对山楂种子表皮 们自行设计了一种用于研究花粉粒表皮厚度和花粉 的纹饰进行分类。由于干燥后的中药山楂果实的种 内壁结构的剥壳方法。其步骤为:采集新鲜花粉 ,用 子外表面常附有一层果胶质和残留的果肉 ,给种子 2 %戊二醛固定 l～3 h ,缓冲液漂洗 2 次每次 15min , 表面分析带来一定的因难 ,通常是采用酸解和超声 1 %锇酸固定 1 h 。漂洗后经丙酮系列脱水 , 临界点 波剥离法 ,但往往不易掌握而造成样品损伤。通过 干燥后备用。取两个干净的扫描电镜样品铜座 ,在 细胞学观察我们发现果肉与种子皮之间有一层果胶 各样品座上表面涂一层树脂胶 ,待树脂半干硬时 ,往 物质 ,利用果胶酶可以使这层果胶物质分解 ,从而清 其中一个样品座上的树脂面撒一层经干燥的花粉 除种皮外表面的残余果肉和杂质 ,获得干净清晰的 粒 ;将另一个样品座树脂胶面向下 ,放在表面撒有花 种皮纹饰照片。具体方法是 :先将种子从果实中剥 粉粒的样品座上。形成铜座 —树脂胶 —花粉粒 —树 (