大白菜转修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂基因获得抗虫植株.pdfVIP

园艺学报2002，29(3)：224。228 j!!堡些垫!!!些些 一一 大白菜转修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂基因获得抗虫植 株 杨广东h2朱 祯3 李燕娥2 朱祝军1 肖桂芳3魏晓丽3 (‘浙江大学园艺系，杭州310029；2』U西农业科学院棉花研究所，运城044000；3中国科学院遗传研究所．北京 100101) 摘要：以大白菜3d苗龄带柄子叶为外植体，经根癌农杆菌(伽如幽血肼f啪咖由”)介导，将修饰 的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(s如)导人大白菜自交系‘GP-11’和杂交种‘中自4号’，并获得了卡那霉素 抗性植株。PCR检测和Southernblot杂交证实，血基因已整合进大白菜基因组中；豇豆胰蛋白酶抑制剂活 性检测表明．大部分转基因植株都对牛胰蛋白酶有一定的抑制活性，对照未转化植株抑制活性根低。室内 离体叶片饲虫和田间自然抗虫性鉴定进一步证明，转基因植株对菜青虫(P／errsrqp雠L．)具有一定抗悻。 关键词：大白菜；修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因；根癌农杆菌；豇豆胰蛋白酶抑制剂活性；抗虫 中围分类号：S634 813 文献标识码：A 文章编号：0513．353X(2002)034r224-05 1；Q inhibitor，cpll)为天然的抗虫物质，对主要农作物害虫都有 豇豆胰蛋白酶抑制剂(Cowpeatrypsin 抑制作用，在植物抗虫基因工程中已得到广泛的应用【lJ。朱祯实验室采用细胞内定位技术对cpt／基因 高【2·“。大白菜与同属的植物相比，植株离体再生能力极低【4J，这严重制约着转基因技术在其品种改 良上的应用。本研究在前期工作基础上【5J，应用农杆菌介导法将a出基因导人大白菜，获得了抗虫效 果较好的转基因植株，并对抗性植株进行分子生物学鉴定和抗虫测试。 1材料与方法 1．1 菌种和质粒 根癌农杆菌(Agrobacter／umtumefac／ens) LBA4404，携带质粒pBinD,SCKt-刚(图1)。该质粒 ／ 含修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(s出)，5’端 添加增强子元件Q序列和信号肽skti编码序列， 在3’端添加内质网滞留信号KEDL编码序列。 @ 1．2大白菜转化及其檀株再生 98：墨：。“。，．。。夕／ 1．2．1 农杆茼转化采用大白菜优良自交系 ／。 ‘GP-!．I’和生产上常用的杂交种‘中自4号’ 、、《一警， (购自中国农科院蔬菜花卉研究所)。取3d苗龄 圈1质粒p卫缸懈 的无菌苗带柄子叶(柄长1一)作外植体，先 嘶ll丑l—CpTI—KDEL为惨饰的豇豆胰蛋白酶抑制荆基因d， P-35 在预培养基(psi，即改良MS+BA4mg／L+IAA s和T—n棚为启动子和终止于。 pIlⅢpI陆n旺 3 5．8)上预培 瞻．1 The脚ot nl∥L+CPG混合物750mg／L，pH modified S 养1 Sia,且l—CF兀·KDELrepre船3t cp【ig。p(5d)，P·35 d后，于oD6‰=0．5的工程菌液侵染 aad and T·r聃repreamtprt删)terkmIir叫憎r髓peelively． 收藕日期：2001—07—16；修回日期