叶绿素的测定分光光度法.pdfVIP

中华人民共和国行业标准 叶绿 素 的测定 分光光 度 法 总则 主题内容 本标准规定了用分光光度法测定水体中的叶绿素 适用范围 本标准适用于河流 湖泊 水库或池塘等水体中叶绿素的测定 干扰及消除 脱镁叶绿素 能够干扰叶绿素 的测定 当含有脱镁叶绿素时叶绿素 的测定值偏高 因此 在测定叶绿素 的时候 还要测定脱镁叶绿素 脱镁叶绿素 对叶绿素 的干扰 可通过测定叶绿素 酸化前后产生的吸收峰之比 对表观叶 绿素 的浓度作脱镁叶绿素 的校正 原理 将一定量的试样用微孔滤膜过滤 收集植物性浮游生物 用 的丙酮溶液提取 将提取液离心 分离后 测定 的吸光度 计算叶绿素的浓度 仪器 分光光度计 比色池 和 医用离心机 离心管 带塞刻度管 研钵 直径约 过滤装置 过滤器 微孔滤膜 孔径 直径 真空泵 吸气泵或蠕动泵 常用实验设备 试剂 碳酸镁悬浮液 称取 细粉末碳酸镁 悬浮于 蒸馏水中 每次使用 时 要充分摇匀 丙酮溶液 在 丙酮中加 蒸馏水 盐酸溶液 量取 盐酸 溶于水中 冷却并稀释至 水利部 批准 实施 样品的采集与保存 样品应按浮游植物定量采样方法 采集在玻璃或聚乙烯瓶子里 河流 湖泊 水库取 池塘 取 采样后 样品应放在荫凉处 避免日光直射 最好立即对水样进行分析处理 如需放置水样 则应 避光冷藏保存 而且每升水样需加 碳酸镁悬浮液 以防止酸化引起色素溶解 步骤 浓缩 在一定量的试样中添加 碳酸镁悬浮液 充分搅匀后 用直径 的微孔滤膜吸滤 过滤器内无水分后 还要继续抽吸几分钟 如果要延时提取 可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷 冻避光贮存 提取 将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中 加入 丙酮溶液 至滤纸浸湿的程度 把滤膜研 碎 再少量地加 的丙酮溶液 把滤膜完全研碎 然后用 丙酮溶液将已磨碎的滤膜和丙酮溶液洗 入带刻度的带塞离心管中 使离心管内提取液的总体积不超过 盖上管塞 置于 的暗处浸泡 离心 将离心管放入离心机中 以 速度离心分离 将上清液移入标定过的 具塞刻度管中 加少量 丙酮溶液于原提取液的离心管中 再次悬浮沉淀物并离心 合并上清液 此 操作重复 次 直至沉淀不含色素为止 最后将上清液定容至 测定 取上清液于 或 的比色池中 以 丙酮溶液为对照溶液 读取波长 和 的吸光度 选择比色池的光程长度或稀释度 使其光密度 大于 小于 结果表示 从各波长的吸光度中减去波长 的吸光度 作为已校正过的吸光度 按下式计算叶绿素的浓 度 式中 叶绿素 的浓度 叶绿素 的浓度 叶绿素 的浓度 提取液的定容体积 过滤水样的体积 比色池的光程长度 已校正过的提取液吸光度 注意事项 使用的玻璃器皿和比色皿均应清洁 干燥 无酸 不要用酸浸泡或洗涤 处的