扩增引进限制性酶切位点技术检测CYP2C9基因的多态性.pdf

No．5 第27卷第5期 暨南大学学报(自然科学版) V01．27 of Oct．2006 2006年10月 JournalJinan Science) University(Natural 扩增引进限制性酶切位点技术检测 CYP2C9基因的多态性 何震宇1”， 杨 红2， 李月琴1， 周天鸿1 (1．暨南大学生物工程学系，广东广州510632；2．广东药学院生物化学与 分子生物学教研室，广东广州510006) 态性的新方法．该方法采用与模板具有1个碱基错配的引物通过PCR在扩增产物中引进限制性 restriction 酶切位点，即扩增引进限制性酶切位点(amphficafion—createdsites，ACRS)，其中通过上 tl和突变型基 游引物在扩增Ar9144Cys位点的片断中引入AvaⅡ切点，使得野生型基因CYP2C9 因CYP2C9丰2的PCR产物中分别含有2个和1个AvaII切点；通过下游引物在扩增Ile359Leu位 点的片断中引入Mva 中分别含有1个和2个Mva 将包含lle359Leu位点的PCR产物用MvaI消化，然后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳一银染进行基因 分型．由于野生型基因和突变型基因的PCR产物中都至少含有1个酶切位点，能完全避免因限制 性核酸内切酶失活或酶切不完全丽导致的基因分型错误． [关键词]CYP2C9基因；多态性；聚合酶链反应；扩增引进限制性酶切位点 [中图分类号]Q356[文献标识码]A Identificationof CYP2C9alleles polymorphic by restrictionsites amplification—-created HE Tian—Hon91 Zhen—yul”，YANGHon92，LIYue．qinl，ZHOU of of (1．DepartmentBiotechnology，JinanUniversity，Guangzhou andMolecular of Biochemistry Pharmacy，Guangzhou510006，China) Biology，GuangdongCollege andaccuratemethodfor theCYP2C9anelicvari— [Abstract]A identifying simple，rapid antswasestablished．ThePCR—based restrictionsitewas amplificatio