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承 德 医 学 院 学 报 V01．27No．42010 根据加热时间不同分为3组：即加热0．5h组、加热lh组、量在组织中沉淀而产生热效应，使肿瘤组织温度上升到有 加热1．5h组。将恒温水浴箱调至所需温度43。C对细胞进效治疗温度，并维持一段时问以杀死癌细胞，又不损伤正 行加热，实验组细胞热疗后，弃上清，加入5ml新鲜培养 常细胞的一种治疗方法。热对细胞的杀伤作用是由于热可 基，置37℃继续培养24h。 以引起蛋白质的变性和细胞结构及功能的损害，热疗可以 1．3膜联蛋白(Annexin．V-EGFP)流式细胞仪检测用不 长时间抑制DNA的合成【引。体外研究表明，热疗通常存在 含EDTA的0．25％胰蛋白酶消化收集上述对照组及不同一个I临界温度，在临界温度以下热诱导细胞凋亡为热作用 加热时间处理组细胞(约5X10’)，PBS洗2遍，1500rpm、的主要机制，而临界温度以上则主要引起细胞坏死州。热 4℃、5min收集细胞，弃上清，加入500ul的Bingding疗能增加肿瘤细胞的血流速度和细胞代谢，这样能使更多 Annexin-V—EGFP及5IJ伊I Buffer悬浮细胞，加入5“1 的化疗药物、放射剂量、基因的靶向治疗作用于肿瘤细胞， 混匀后，室温避光反应15rain，采用流式细胞仪检测心肌能更加有效的控制肿瘤晦1。本实验采用43℃水浴不同的加 细胞膜PS外翻的情况，用Muticycle软件分析计算凋亡 心肌细胞的百分比。结果判定：AnnexinV-／PI-为正常 细胞，AlmexinV+／PI-为凋亡细胞，AnnexinV+／PI+细胞凋亡率仅为13．23％，加温处理组细胞凋亡率为20．07 为坏死细胞，实验重复3次，取均数。 ％、25．52％、32．83％。实验组与对照组相比：细胞凋亡率 1．4统计分析实验数据以叉±s表示，统计学处理，采 明显增加妒0．01)，随着加热时间的延长，细胞凋亡率增 用SPsslO．0统计软件，计量资料多组间的比较用方差分 加。提示加热可诱导肝癌HepG2细胞凋亡，且凋亡情况与 析、两两比较采用q检验。 加热时间有关。流式细胞仪是目前定量检测细胞凋亡的常 2结果 用方法，常用于检测因DNA损伤而引起的细胞凋亡叫。本 膜联蛋白(Annexin-V-EGFP)流式细胞仪检测各实验为临床应用热疗治疗肿瘤提供了一定的实验依据，但 组HepG2细胞的凋亡情况：Annexin-V是一种细胞膜磷热疗具体通过何种途径诱导细胞凋亡有待进一步研究。 脂酰丝氨酸(PS)亲和蛋白，经EGFP荧光标记后的荧光强 【参考文献】 度反映细胞膜的PS密度，进而反映细胞凋亡率。经流式细 【l】刘连新，周津，王秀琴，等．凋亡相关基因在肝癌及正常 胞仪检测对照组HepG2细胞凋亡率仅为13．23％，加温处 [2】2 CummingsMC，WinterfordCM，Walker 理组细胞凋亡率为20．07％、25．52％、32．83％，实验组与 Am JSurgPathol，1997，21(I)：88—101． 对照组相比，细胞凋亡率明显增加(尸0．01)，随着加热时 a1．Thecellularand 【3】HildebrandtB，WustP,AhlersO，et 间的延长，细胞凋亡率增加。提示加热可诱导肝癌HepG2 molecularbasis RevOncol