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犬瘟热病毒磷蛋白的表达及抗体制备.pdf
犬瘟热病毒磷蛋白的表达及抗体制备
王晓杜+袁庄川梅匀安张敏周圻’
浙江农林大学动物科技学院，临安311300
+通讯作者，xiaoduwaIlg@163．com；azhouqi@aliyIln．com
了小鼠抗CDV-P抗体，检测CDV感染细胞内P蛋白的表达和细胞定位，检测不同感染时间细胞内P蛋白的
表达。SDS．PAGE电泳结果表明，获得重组蛋白的分子量大小为65l(D，表达的蛋白以包涵体形式存在，占
别原核表达产物和病毒感染表达产物，CDV-P在感染细胞内具有两种表现形式(磷酸化和非磷酸化)；间接
免疫荧光结果显示，该蛋白在胞浆和胞核中都存在；CDV-P在病毒感染的早期和晚期都有表达，随着感染
时间延长表达逐渐增加，并且其磷酸化水平也逐渐增加。本研究制备了重组P蛋白和多克隆抗体，检测了
P蛋白在感染细胞内的表达和定位，为P蛋白功能和CDV致病机理研究提供基础资料。
关键词犬瘟热病毒，磷蛋白，原核表达，病毒感染，细胞定位
and ofConine 秒irz岱
Expression
AntibodyPreparement dis￡e，7，妒er
Phospho—protein(P)
WANGXiao—Du+ⅥJAN MEIY．硼一AnZHANGMin
ZHOU
Zhuang—Chuan Qi’
ofAnimalScienceand and 311
C01lege Forestry 300，China
TecllIl0109y，ZhejiallgA卯culture Universi吼Lin’aIl
+correspondingaumors，xiaoduwaIlg@163．com；azhouqi@aliyun．com
AbstractChnine a ofacuteinfectious caused
d泌把，nper秽irw(CDV)ispathogen disease，whichfever’
in
andcen昀1nen，ous disordersC口n括andj飞f括．The
di础ea，pneumonia system phosphorylationprotein(P)
is to and CDVIntllis to∞弘P
importantreplicationpathogenici够ofstudy，according
AF1 were 6．0sofhvare．TheP wasclonedreverse
64967)，primersdesignedbyprimerprimer gene bv
chain subclonedinto of
transcriptional reaction(ImPCR)，and
polymerase plasmidpET-28(a)．ThepET_28(a)一
CD弘Pwasconstructedandidentified and was
byenzymedigestionsequencing．ThepET-28(a)一CD弘P
transfectedinto上■c砘ric危施co屁BL2 his—CDV二Pwas inEco屁BL2
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