猪瘟病毒Core蛋白的原核表达和抗体制备及应用.pdfVIP

畜牧与兽医2015年第47卷第6期 ·7· 猪瘟病毒Core蛋白的原核表达和抗体制备及应用 景娇1，张小敏1，何丹妮1，刘珂2，周斌h，陈溥言1 (1．南京农业大学动物医学院，江苏南京210095；2中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241) 后，克隆到携带His标签的原核表达载体pColdI中，成功构建了重组质粒pCold—Core，并转化到大肠杆菌Rosseta mmolfL 达目的蛋白并鉴定表达效果。结果表明：经终浓度为0．1 IPTG诱导24h后，Core基因在R2中获得分泌性可溶表达，表达量占菌体蛋白 的32．6％，SDS—PAGE显示目的蛋白相对分子质量为20ku。Western 性反应，均出现单一反应带。将目的蛋白切胶后免疫Balb／c小鼠，制备特异性抗血清，Westernblot结果显示该抗血清与衣壳蛋白反应后有明显 的特异性条带，经激光共聚焦鉴定抗血清能够与胞浆中的猪瘟病毒粒子发生反应。结果表明，Core基因表达成功，制备的抗血清具有生物学功 能。本研究为深入探讨Core蛋白在猪瘟病毒致病机制上的作用奠定了基础。 关键词：猪瘟病毒；Core蛋白；原核表达；抗血清 中图分类号：$852．65 文献标志码：A 文章编号：0529—5130(2015)06—0007—05 ofclassicalswinefevervirusCore Prokaryoticexpression protein and ofits applicationpolyclonalantibody JING Jia01，ZHANGXiaominl，JINGJia01，HEDannil，LiuKe2，ZHOUBinh，CHEN Puyanl ofVeterinary 210095，China； (1．College Medicine，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing Research of 20024 2．ShanghaiVeterinary Institute，ChineseAcademyAgriculturalSciences，Shanghai1，China) ona of Core fromthe of Abstract：Based Core pairspecificprimers，thegene(307bp)wasamplified plasmidpMD—Corecontaininggene classicalswinefever intothe vectorof I theHislabelandverified virus(CSFV)，cloned prokaryoticexpression pColdcarrying byenzyme andDNA thisrecombinant wastransformedintoEscherichiacoliRosetta CSFVCore digestion sequencing．Then plasmidpCold-Core