实验六 水中细菌总数的测定和纯种分离.pptVIP

实验六 水中细菌总数的测定 一 实验目的 1　学习水样的采取方法和水中细菌总数测定的方法。 2　了解水源水的平板菌落计数的原则。 二 基本原理 本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖。因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 三 实验操作步骤 1　水样的采取 （1）自来水 先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5min后，以灭菌三角瓶接取水样，以待分析。 （2）池水、河水或湖水 应取距水面10-15cm的深层水样，先将灭菌的带盖玻璃瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。 ? 2 细菌总数测定（3人一组） （1）稀释水样 取2个装9ml灭菌水的试管，取1ml水样注入第一管9ml灭菌水内，摇匀，再自第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10-1、10-2。 （2）自最后两个稀释度（ 10-1与10-2）的试管中各取1ml稀释水加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做两个培养皿。 池水、河水或湖水等 水源水 （3）做两个空白对照（从无菌水管中直接取1ml水样接入空的灭菌的培养皿中。 （4）各倾注15ml已溶化并冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼 脂培养基，立即放在桌上摇匀（防止溢出）。 （5）凝固后倒置于37℃培养箱中培养24 h。 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 水源水 9毫升无菌水 1ml 1ml 1ml CK对照 先接种稀释水样 再倾注培养基 10-1 10-2 37℃培养 细菌总数愈多，污染愈重。 3 菌落计数及报告方法（参照书363页） （1）先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应该采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。 （2）首先选择平均菌落数在30-300之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数（见表中例1）。 （3）若有两个稀释度的平均菌落数均在30-300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取两者的平均数；若大于2，则取其中较小的菌落总数（见表中例2及例3）。 （4）若所有稀释度的平均菌落数均﹥300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数（见表中例4）。 （5）若所有稀释度的平均菌落数均﹤30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数（见表中例5）。 （6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数（见表中例6）。 表 计算菌落总数方法举例 例次 不同稀释度的平均菌落数 两个稀释度 菌落数之比 菌落总数（个/ml） 备注 10-1 10-2 10-3 1 1365 164 20 — 16400或1.6×104 两位以后的数字采取四舍五入的方法去掉 2 2760 295 46 1.6 37750或3.8×104 3 2890 271 60 2.2 27100或2.7×104 4 无法计数 1650 513 — 513000或5.1×105 5 27 11 5 — 270或2.7×102 6 无法计数 305 12 — 30500或3.1×104 计算方法 稀释度 10-1 10-2 CK对照 平板 1 2 1 2 1 2 菌落数 平均菌落数 去除对照后菌落数 细菌总数/ml 池水、湖水等水源水 四 实验报告书写格式 1 实验目的 2 实验步骤 3 实验结果（原始数据附表格） 4 实验结果计算（附表格） 5 分析与讨论 五 思考题 （1）你所测的水源水的污秽程度如何？ （2）国家对自来水的细菌总数有一定标准，那么各地能否自行 设计其测定条件（诸如培养温度、培养时间等）来测定水 样总数呢？为什么？