染色体7q32-ter鼻咽癌相关基因的初步研究.pdfVIP

2001；勰(5) 生袖化学与生物物理进展pr曜．Biod啪．Bioph黔 7ll 染色体7q32．ter鼻咽癌相关基因的初步研究* 张小慧李忠花张必成董利周 鸣曹荆唐珂李伟芳李桂源“ (中南大学湘雅医学院肿瘤研究所，长抄410078) 摘要为克隆7q32一t盯区域等位基因杂台性丢失最小共同缺失区的鼻咽癌相关基因．以印s聊s509为探针， P(R法筛选位于该区的细菌人工染色体(BAc)克隆，应用EsT介导的定位候选克隆策略并结合生物信息学筛 选出在鼻咽癌细胞株和活橙组织中表达增强的￡srAA．玎3454，cD心蛆克隆测序和生物信息学资源获取全长 出NA，DNA印迹和甲基化分析研究其表达增强的机制结果表明，克隆的NAGl8基因cDNA全长802bp，编 码227个氨基酸，定位于胞核．该基因分别与人、鼠TA)【REBl07基因及RPL6基因高度同源其表达增强的机 制不是基因拷贝数的丢失和甲基化位点的改变可以断定NAGl8是定位于7q32一t目最小共同缺失区的鼻咽癌相 关基因，它是一高度保守的基因．参与了DNA的转录活化 关键词7q32一ter最小共同缺失区，鼻咽癌，相关基因 学科分类号R73 人类肿瘤的发生是一个包含多重遗传变化的多 1材料与方法 步骤过程，其中一项重要的遗传变化是肿瘤抑制基 因的失活和瘤基因的激活L11研究表明，环境因 1．1组织和细胞 素和遗传因素的协同作用是鼻咽癌的主要病因环 低分化鳞状上皮鼻咽癌细胞株州El为本所 境因素方面，EB病毒与鼻咽癌的相关性已得到肯 建株【5J，原代培养的正常人胚鼻咽上皮细胞12例． 定，丽在遗传因素方面，对已知瘤基因和抑瘤基因 12例原发性鼻咽癌活检组织由湖南省肿瘤医院提 的研究没有发现与之特异相关的基因．对鼻咽癌的 供，病理诊断均为低分化鳞癌，且活检前未经放疗 of 等位基因杂合性丢失分析(10ss het目Dzy90Sity， 和化疗． LOH)和基因表达谱的研究都表明还有多个未知1．2 RAc DNA抽提与测序 的肿瘤相关基因在鼻咽癌的发生发展中起作用．分 子遗传学和细胞遗传学的研究表明：鼻咽癌细胞在 Pl脚IlidMaxi 司，采用QIAGEN公司的QIA』ilter 7q32-ter区有非随机的染色体片段丢失【2』，其后研 Kits抽提和纯化质粒所有操作步骤按试剂盒提供 究发现在7q32一ter的微卫星位点D7S500～聊S495 的方法进行． 附近存在约30％～46％的高频率等位基因杂合性 BAc DNA测序采用鸟枪法：气雾法打断 缺失，遗传距离约9．8cM，强烈提示该区域定位 DNA，末端补平并加“A”，连接、转化到大肠杆 J 有与鼻咽癌密切相关的抑瘤基因L3 最近采用更 菌，PcR检测，随机挑选50个阳性亚克隆采用 高密度的微卫星位点分析显示研S500一町s509一 ABI自动测序仪进行自动测序(由大连宝生物技术 所S495是IDH高频率缺失集中的区域，最小共同 有限公司测序)． 缺失区在