恩诺沙星免疫抗原的制备与鉴定.pdfVIP

中国动物检疫 2010年第 27卷第 6期 ——43—— 恩诺沙星免疫抗原的制备与鉴定 宓晓黎，李利东，黄丽俊，杜姝莲，袁建兴 (江苏省微生物研究所有限责任公司，江苏无锡 214063) 摘 要：通过N一羟基琥珀酰亚胺活化酯法合成恩诺沙星免疫抗原，用聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外光谱和酶联 免疫法分析对恩诺沙星免疫抗原的结构、分子量、免疫原性等特征进行鉴定。经紫外光谱分析恩诺沙星一牛血清白蛋 白偶联比为5：1，紫外光谱峰形发生变化并位移 间接酶联免疫法分析证明其免疫兔所获得的抗体与恩诺沙星有 良 好的特异性，半数抑制浓度为60ng／mL。实验结果表明成功合成了恩诺沙星免疫抗原，并获得 了抗恩诺沙星抗体，为 ELISA或TRFIA等免疫方法的进一步研究提供 了试验基础。 关键词：恩诺沙星；免疫抗原合成；N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法 中图分类号：$852．43；TS207．53 文献标识码：A 文章编号：1005—944X(2010)06—0043—03 Synthesisand Identification ofEnrofloxacinAntigen MIXiao—li，LILi—dong，HUANGLi-jun，DU Shu-lian，YUAN Jian—xing (JiangsuInstituteofMicrobiologyCo．Ltd．，Wuxi214063，China) Abstract：TheimmunogenENR．B．SA (enrofloxacni．．bovnieserum albumin)weresynthesizedbyhteN ．．Hydroxy- succinimideactiveestermehtod．TheconjugationswereidentifiedbySDS—PAGE，UV andanimalimmunization test．Thecouplnigmolarratiosofhte hapten and carrierproteniswere5：1forENR —BSA．Theantibodiesshowed hte50％ inhibitionofcontrolvalues Oc~o)of60rig／mE byci．ELISA．Th eantigenicconjugateswereartificially synhtesized and hte anti— enrofloxacni natibody received，which provides hte experimentalbasis forhte further study ofELISA orTRFIA． Keywords：enrofloxacin；snyhtesisofhteartificialantigen；N．Hydroxysuccniimideactiveestermethod 恩诺沙星 (ENR)属于喹诺酮类药 展趋势，但联用技术所需仪器设备昂 (LABCON公司)；高速冷冻离心机 物 ，又名乙基环丙沙星 ，为第一个畜 贵，而普及度不高。免疫分析法具有很 CR22F(日立公司)；磁力搅拌器 (广州 禽专用的氟喹诺酮类药物。该药抗菌 高的选择性和灵敏性，且操作简捷，尤 仪科实验技术有限公司)。 谱广，内服及肌肉注射吸收迅速 ，且 其 是 时 间 分 辨 荧 光 免 疫 分 析 恩诺沙星对照品，中国兽医药品 在体内代谢为同样具有抗菌活性 的 (time—resolved fluoroimmunoas— 监察所；牛血清 白蛋 白①sA)，上海源 环丙沙星，代谢物生成与消除缓慢、 say，TRFIA)更显优势圈。免疫方法的 东生物科技有限公司；卜乙基 3一(3一 分布广泛，是畜牧养殖业中治疗畜禽 关键试剂之一是高特异性抗体 ，ENR 二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐 (EDc)， 疾病的常用药之一，在动物体内药物 与载体蛋白的偶联物则是动物产生抗 上海丽珠东风生物技术有限公司；N一 残留通过食物链，除了其毒副作用对 体的免疫原。本研究采用改良N一羟基 羟基琥珀酸亚胺 (NHS)，Acors公司； 人直接危害外，更为严重的是诱导人 琥珀酰亚胺活化酯法制备了恩诺沙星 羊抗兔 IgG—HR