男性不育患者Y染色体上DAZ基因微缺失测定及临床意义.pdfVIP

V01．29 20l1No．12 男性不育患者Y染色体上 DAZ基因微缺失测定及临床意义 王家吉，任玉林，岳中瑾，付生军，史庭凯，马宝良 (兰州大学第二医院，甘肃 兰州 730030) 摘 要：目的 通过检测无、少精症不育患者睾丸、精液基因组DAZ基因缺失情况，探讨对其病因的基因诊断方法。方法 选 择35例特发性无、少精症不育患者作为研究对象，其中少精症 18例、严重少精症 12例、无精症5例；选择 10例正常已生 育健康男性作为正常对照组。应用PCR技术，检测睾丸、精液基因组中Y染色体上特异性序列标签位点(SrIS)的引物扩增， 了解基因缺失情况。结果 35例患者中5例睾丸、精液基 因组微缺失，其中无精症3例，严重少精症2例；其余 30例患者和 10例正常对照组男性的睾丸、精液基因组未见基因微缺失。结论 DAZ基因微缺失是无、少精症的原因之一。 关键词：DAZ基 因微缺失；无精症；少精症 中图分类号：R195 文献标识码：B 文章编号：1671—1246(2011)12—0109-03 近年来，Y染色体的微缺失成为引起男性不育的病因正逐 密度5×109几；少精症 ：精子密度在5xlO 20xl0ffLo正常精子 渐受到众多学者的关注 ，特别是AzF(AzF基因分为 AZFa、 数：20x109L／。精液检查包括精子的活力、形态、记数、pH值和 AZFb、AZFe3部分 ，DAZ基因为AZFc中的一部分，在基因缺失 存活率。 中多见)基因微缺失引起男性不育比较常见。遗传与环境的改 1．2 方 法 变与不育有直接关系。另外，机体的氧化应激会引起精子DNA 选取 Y染色体最常见 的微缺失位点 AZFe区的DAZ 突变和Y染色体缺失，使精子的抗氧化能力下降，精子数量减 (SY254)，DAZ一1、DAZ-2与 AZFb区的热休克转录因子(HS- 少，从而引起少精症和无精症。本研究旨在通过检测无、少精症 FY)进行PCR扩增检测，同时选取男性性别决定基因(sRY)作 不育患者精液、睾丸基因组中基因的表达，探讨Y染色体微缺 为内对照。如果测试样品未见特异的SRY基因条带，说明基因 失引起无、少精症患者病因的基因诊断方法或Y染色体微缺失 组DNA扩增或实验条件失败；如果测试样品不能扩增出Y染 的筛查方法。 色体上的特异基因位点，则意味着测试样品的Y染色体有该位 1资料与方法 点微缺失。初筛异常的标本均经 3次PCR重复检测证实。 1．1一饭资料 1．2．1合成 SRY、SY254DAZ-1、DAZ-2HSFY 引物 由上 35例患者精液、睾丸标本来源于2006年 11月～2009年 12 海生工生物工程技术服务有限公司合成，寡核苷酸引物片段序 月在兰州大学第二医院泌尿外科门诊就诊的患者。其中少精症 列及扩增产物片段长度见表 1。 18例，严重少精症 12例，无精症5例。患者年龄23—4O岁，平均 表 1 引物序列及扩增片段的长度 28岁，婚后不育年限 1．5～5年，平均 3．5年。所有患者性功能正 引物名称 引物序列 产物片段长度 常，无生殖系统器质性病变及炎症、阻塞等。检测前抽静脉血检 SRY 上游引