抗稻瘟病水稻BAC文库的构建与鉴定.pdfVIP

第 13卷 第 3期 上 海 大 学 学 报 (自然 科 学 版 ) v01．13No．3 2007年 6月 JOURNALOFSHANGHAIUNIVERSITY (NATURALSCIENCE) Jun．2007 文章编号：1007—2861(2007)03—0325—06 抗稻瘟病水稻 BAC文库的构建与鉴定 陈 琪 ， 邵一文。， 黄彬彬 ， 孙晓明 ， 张文文 ， 王 刚 ， 许政暄 ， 宋任涛 (1．上海大学 生命科学学院，上海 200A．A．4；2．上海市能源作物培育及利用重点实验室，上海 200444； 3．中科院 上海植物生理生态研究所，上海 200032) 摘要：水稻是一种重要的粮食作物，同时也是一种重要的单子叶植物模式．稻瘟病是水稻生长中的一种严重病害， 因此分离和克隆新的稻瘟病抗病基因具有重要的应用价值．以一个抗稻瘟病农家种水稻为材料，以plndigoBAC5为 载体，构建了细菌人工染色体 (BAC)文库 ．该文库共有 90000个转化子，插入频率 99％，插入片段平均长度为 105 lb【，由此推测这个文库覆盖水稻基 因组约20倍 ．利用其中的45000个转化子建立了4维 PCR筛选体系 ，并且通过4 维PCR筛选体系，筛选获得了7个含水稻分蘖基因(MOC1)的阳性克隆．因此该文库是一个高质量、高覆盖率的水 稻BAC文库 ，能有效用于 目的基因的分离． 关键词：水稻；稻瘟病 ；细菌人工染色体文库 ；4维PCR筛选体系 中图分类号 ：Q785 文献标识码 ：A ConstructionandCharacterizationofaBacterialArtificial ChromosomeLibraryfrom BlastResistanceRice CHENQi。， DENGYi．wen， HUANGBin—bin， SUNXiao—ming， ZHANGWen—wen， WANG Gang一， XU Zheng—kai，一， SONG Ren—tao， (1．SchoolofLifeSciences，ShanghaiUniversity，Shanghai200444，China； 2．ShnaghaiKeyLaboratoryofBio—energyCorp，ShanghaiUniversity，Shanghai200444，China； 3．ShnaghaiInstituteofPlantPhysioloygandEcology，ChineseAcademyofSciences，Shanghai200032，China) Abstract：Riceblastisaseriousdiseaseinproduction．Thereforetheisolationofnovelblastresistancegeneis important．Weconstructedabacterialartificial chromosome (BAC)libraryfrom ariceveritywithblast resistancewithvectorplndigoBAC5．TheBAClibraryconsistedofabout90000clones，99％ ofthewhichhad insertionwith an averageinsertion sizeofabout105 kb．The BAC librarywasestimatedtohave20 times genomecoverage．Halfofthelibraryconsistingofabout45000 cloneswasused todevelopa4-dimensional PCR screeningsystem ．throughwhi