汪子伟.淋巴细胞亚群和FCM的临床应用(武汉).pdfVIP

淋巴细胞亚群和FCM临床应用 汪子伟 主任技师 我的FCM情结 • 1997年第一次使用流式细胞仪，浙江省人民医院中心实验 室购买了Coulter Epics，主要用于淋巴细胞亚群、活化血小 板、MRD 、白血病免疫分型及临床科研等 • 2001年后，杭州市第一人民医院购买了BD FACSCalibur4色， 2003年又购买6 色的，主要开展淋巴细胞亚群、白细胞免疫 分型、活化血小板、细胞因子CBA等 • 我和同事们在自己实验室一开始就使用仪器附带的BD 自动 分析软件、BD 自动进样系统、向临床报告淋巴细胞亚群绝 对值并建立了正常人群参考范围 迪安诊断在杭州就有三台BD的流式细胞仪，仅“TBNK淋 巴细胞亚群”现在每天超过200 （经常超过300）个标本 Medline历年有关“淋巴细胞亚群”的论文 数 用关键词“lymphocyte subsets”搜索 内容和思考 • 免疫系统和淋巴细胞 • 淋巴细胞亚群分析演变 • 淋巴细胞亚群的应用 • 为什么临床迫切需要淋巴细胞亚群 分析？ • 临床需要怎样的淋巴细胞亚群分析 报告？ • 为什么淋巴细胞亚群是FCM临床应 用的一个切入口？ 免疫系统和淋巴细胞 免疫系统和淋巴细胞：外周血中的淋巴细胞 免疫系统和淋巴细胞：淋巴细胞的分化成熟 免疫系统和淋巴细胞：TBNK淋巴细胞亚群 免疫系统和淋巴细胞：T （淋巴）细胞 • T细胞，即胸腺依赖性淋巴细胞，主要担负细胞免疫功能， 包括CD4细胞和CD8细胞 • CD4+细胞，主要是辅助性T细胞（Th），通过与MHCⅡ （主 要组织相容性复合体Ⅱ）递呈的多肽抗原反应而激活。 MHCⅡ在抗原递呈细胞（APCs）表面表达。一旦激活，可 以分泌细胞因子，调节或者协助免疫反应。 • CD8细胞又包括以下两群： • 抑制性T细胞（Ts）具有抑制细胞免疫及体液免疫的功能 • 细胞毒性T细胞（Tc）具有杀伤靶细胞的功能 免疫系统和淋巴细胞：细胞免疫反应举例 免疫系统和淋巴细胞：B （淋巴）细胞 •B细胞，最早在禽类中发现，称（法氏）囊 依赖性淋巴细胞，祖细胞存在于胎肝的造 血细胞岛中，此后B淋巴细胞的产生和分化 场所逐渐被骨髓所代替 •其分化成熟经历前B细胞、不成熟B细胞、 成熟B细胞、活化B细胞和浆细胞五个阶段 •其体积略大于T细胞，在受抗原刺激后，会 增殖分化出大量浆细胞。浆细胞可合成并 分泌抗体于血液循环中 •担负体液免疫功能的主要细胞 免疫系统和淋巴细胞：体液免疫反应举例 免疫系统和淋巴细胞：活化淋巴细胞 •大部分淋巴细胞处于“休眠”状态(在细胞 周期的G 期) 0 •正常情况下人体只有一小部分淋巴细胞处 于活化状态，这些淋巴细胞是具有功能和 活性的 •在自身免疫病（如风湿病）活动期，活化 淋巴细胞的比例增高 •当活化淋巴细胞严重减少时，应当注意继 发全身性化脓性感染 淋巴细胞亚群分析的演变：认识淋巴细胞 •淋巴细胞转化试验 •绵羊红细胞花环（玫瑰花结） •小鼠红细胞花环 •空斑形成细胞(Plaque forming cell ) •APAAP桥联酶标法测定淋巴细胞亚群（%) •流式细胞术测定淋巴细胞亚群(%和#) 淋巴细胞亚群分析的演变： 淋巴细胞转化试验 • 培养基内加入植物凝集素（诱导T细胞），48小时观察 结果 淋巴细胞亚群分析的演变： 绵羊红细胞花环（玫瑰花结） • 系当时测定T细胞的方法 • 我们的改进是用克脑迷（Antiradon ）处理绵羊红 细胞，4 ℃可保存1周 • 与小鼠红细胞形成花环的为B淋巴细胞 淋巴细胞亚群分析的演变： 空斑形成细胞检测 淋巴