植物叶绿素电导率以及一些酶的测定.docVIP

叶绿素含量的测定 植物体内的叶绿素在代谢过程中一方面合成，一方面分解，不断地更新。在环境条件不适宜时，叶绿素的合成就受到影响；而分解过程仍然进行，植物的光合作用就会受到抑制。因此，植物体内叶绿素含量的多少反映了植物抗逆（包括抗旱）能力的大小。叶绿素含量采用比色法测定，测定方法参照《植物生理学实验》（气象出版社，1995）所介绍的方法。 本实验中，欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b的含量，只需测定该提取液在两个特定波长下的光密度D值，并根据叶绿素a、b在该波长下的比吸收系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光选择叶绿素在红光区（550nm）的最大吸收峰。 已知叶绿素a、b在1：1的乙醇-丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm和645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的系数分别为82.04和9.27，在波长645nm下分别为16.75和45.60，根据加和性原则列出以下关系式： D663=82.04Ca+9.27Cb (3-1) D645=16.75Ca+45.06Cb (3-2) 式（3-1）、（3-2）中的D663和D645为叶绿素溶液在波长663nm和645nm时的光密度，Ca、Cb分别为叶绿素a、b的浓度，以mg/dm3为单位。 解方程组（3-1）、（3-2），得： Ca=12.72D663-2.59D645 (3-3) Cb=22.88D645-4.67D663 (3-4) 将Ca与Cb相加即得叶绿素含量CT CT=Ca+Cb=20.29D645+8.05D663 (3-5) 本实验中叶绿素含量测量选取与测定光合作用相同位置和发育阶段的叶片0.2g，剪碎后加入1：1的乙醇-丙酮混合液中，定容至25mL，在黑暗中常温浸提72小时。然后将提取液摇匀，倒入干净的比色皿中，用分光光度计（UV-3150,Shimadzu Co.,Japan）分别测量其在663nm，645nm的吸光度值D663，D645，按照Arnon法的修正公式计算。 叶绿素a（mg/g）=Ca×V/W 叶绿素b（mg/g）=Cb×V/W 叶绿素总量（mg/g）=CT×V/W 其中V表示提取液的体积（L），W表示溶解的叶片的重量。 相对电导率的测定 将样品叶片用打孔器打取10个面积相同的小叶片，放入试管中，加10mL去离子水，置25℃下10小时。用玻璃棒搅拌均匀，然后用电导仪测电导值C1。再将试管放入沸水中10分钟，待其冷却至25℃时，测得电导值为C2，按下式计算相对电导率： 相对电导率（%）=（浸泡液电导值C1/煮沸也电导值C2）×100% 注意事项： （1）在电导测定中一般应用去离子水，若制备困难可用普通蒸馏水代替，但在测定中设一空白试管，测定样品时要同时测定其空白电导值，按下式计算相对电导度： 相对电导率=[（C1—空白电导值）/（C2—空白电导值）] ×100% （2）CO2在水中的溶解度较高，在测定电导时要防止高CO2气源和口中呼出的CO2进入试管，以免影响结果的稳定性。 （3）温度对溶液电导影响很大，故C1与C2必须在相同温度下测定。 抗氧化酶系统测定 酶液的提取：取0.5g新鲜植物叶片于预冷研钵中，加入0.05mol/L磷酸缓冲液PBS（pH7.8）5mL冰浴研磨，移入10mL离心管中后在4℃、15000r/min离心机上离心15min，取上清液用做酶活性的测定。 试剂配制： A液（0.2mol/L Na2HPO4溶液）：称取71.64g Na2HPO4·12H2O用H2O定容至1L。 B液（0.2mol/L NaH2PO4溶液）：称取31.2g NaH2PO4·2H2O用H2O定容至1L。 ①0.05mol/L PBS（pH7.8）溶液：228.75mL A液+21.25mL B液，加水稀释至1L。 ②0.05mol/L PBS（pH7.0）溶液：610mL A液+390mL B液混合即可。 ③0.1mol/L PBS（pH6.0）溶液：61.5mL A液+438.5mL B液，加水稀释至1L。 ④130mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液：称取1.9399g Met用0.05mol/L PBS（pH7.8）溶液定容至100mL。 ⑤750μmol/L氮蓝四唑（NBT）溶液：称取0.06133g NBT用0.05mol/L PBS（pH7.8）溶液定容至100mL，避光保存。 ⑥100μmol/L EDTA- Na2溶液：称取0.03721g EDTA- Na2用0.05mol/L PBS（pH7.8）溶液定容至1L。 ⑦20μmol/L核黄素溶液：称取0.00