抗生素AGPM发酵条件优化和发酵动力学.pdfVIP

抗生素AGPM发酵条件优化与发酵动力学 牛晋阳 陈贵斌 张建勇 元英进 (天津大学化工学院生化工程系，天津300072) 摘要 论文考察了通气圣和挽井转速对祈型扰生素AGPM发醉的影响，通过实脸确定出杭生素AGPM 在30L发眯雄的批式发酵条件为:挽掉转速560rpm，在前期通气1为1.2- ，发醉后期为1.0vvm, 并在优化后的操作条件基袖上对30L发醉雄发肆动力学进行了研究。 类.调 扰生素 桩霉苗 工艺条件 发眯动力学 微生物是自然界量丰富的天然药物资源之一，开发微生物的次生代谢产物以得到抗癌、抗 菌等天然药物或先导化合物具有重要价值。本实验室从土壤中筛选得到一株新的链祥菌变种 (Streptomycessp)，其次生代谢产物对多种革兰氏阳性菌具有显著的抑制作用，该产物尚未见文献 报道 (其结构正在鉴定中)，具有良好的应用开发前景。本文研究了发醉嫩的搅拌速率和通气量 对其发醉活性的影响，确定出了较为合适的发酵操作条件。 1 材料和方法 1.1 蔺种 链霉菌变种 (Streptomycessp)从土壤中分离。 枯草芽抱杆菌 (bacillussubtilis)由天津轻工业学院提供。 1.2 培养基: 细菌培养基’【〕:牛肉青蛋白陈固体培养基。 种子培养基 (g/L)有萄糖5、可溶性淀粉20,蛋白陈4、玉米浆2.OmL,K2HP0,0.5, MgSO,7H,00.5,NaCIO.5、自来水1000mL,pH6.0,121℃灭菌15min. 发醉培养基 (gIL):葡萄糖5、玉米淀粉40、黄豆饼粉16、玉米浆2mL,K,HP0,1.0,MgSO, 7H,00.5,NaCl0.5,淀粉醉0.05、起始pH5.5，自来水1000mL.30L发醉魄实际装液量20L, 实堆 121℃灭菌15nun. 1.3 仪器与设备 30L发酵峨:德国B.Braun公司。 1.4 培养方法 液体一级种子培养:将活化好的斜面抱子转接于液体培养基，装液量50mlJ25OmL三角瓶， 2890,220rpm摇瓶培养48h，转接到二级摇瓶种子培养基。 液体二级种子培养:将289C培养48h的一级种子以10%的接种量转接至二级种子培养基， 装液量l50mUlOOOmL三角瓶，28C9,220tpm摇瓶培养30h，转接发醉旅。30L发醉暇发醉条件: 将上述二级种子培养液以10%的接种量接于30L发醉嫩中。 1.5活性侧定方法 (杯碟法(21) 将3790培养48h的枯草芽抱杆菌 (浓度为10CFU/.L)0.5mL与12mL冷却至50℃左右的细 菌培养基混合倒人已灭菌直径10cm的培养皿中，待凝固后，放置牛津杯，取一定量过滤发酵液 置于牛津杯中，37℃培养24h,量取抑菌透明圈直径即可表示相应活性，或与序列稀释所得标准 曲线对照即可得到绝对活性。 164 1.6 生伪蚤的测定 取发酵液20mL，加水50mL，布氏滤斗抽滤，再以约50mL生理盐水洗涤3次，抽千，真空 干燥烘箱烘干至衡重，称取菌体干重。 1.7 还原糖的测定 还原搪的测定参见文献[31 2 结果与讨论 2.1 通气责对发酵的影响 从图1.可以明显看出，通气量越高，活性 产物的积累量越大。在整个发酵过程中，活性 产物的积累过程也存在较大差别。在发酵初 期，种子液带人的活性都因微生物进人新环 ︵ 杖 甘 印 境、代谢调整而表现为单位体积发醉液活性下 降;但在通气量较高 (1.2m)时，活性下降 b 窗 乞 如 n 较小。从活性最大值看，通气量越大，活性越 召 高。在发酵达到50h左右，表现为一次活性下 匕 降过程，而且通气量越大变化越明显;显然， 0 2 其活性下降与代谢调整有关。因此合理调控该 点工艺，科学调节微生物的生长与代谢之间的