禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)原生质体制备与再生的研究.pdfVIP

艋物铄靠2015，4l(3)：79—85 P缸押￡PrDf鲥iD行 禾谷丝核菌(删拙f伽施c阴m觚) 张德珍1’2， 陈晓霞1， 高先悦1， 于金凤¨ (1．山东农业大学植物保护学院植物病理学系，泰安271018；2．潍坊科技学院，寿光262700) 摘要禾谷丝核茵(R^波of￡D靠谊cP他nzis)是引起我国小麦纹枯病的主要致病茵。为了建立高效稳定的禾谷丝核菌 遗传转化体系，本试验比较研究了不同细胞壁降解酶、酶液浓度、酶处理温度和时间等因素对禾谷丝核茵原生质体 制备的影响，利用正交设计试验优化了原生质体再生务件。结果表明，液体培养6d的茵丝，采用15mg／mL溶壁 酶+10mg／r11L蜗牛酶组成的混合酶液，30℃下酶解4h，可以获得较高的原生质体释放量，可达到3．O×106个／ mL；禾谷丝核茵原生质体再生的最佳条件是以SuTC缓冲液作为渗透压稳定剂悬浮原生质体，采用单层混茵法接 种于TB3再生培养基，原生质体再生率可达到58．6％。禾谷丝核茵原生质体制备和原生质体再生条件的优化，为 深入研究禾谷丝核茵生长发育的分子遗传学基础和进一步探索小麦纹枯病的致病机理奠定了基础。 关键词禾谷丝核茵； 原生质体； 制备；再生 S435．121．49 A 0529—1542．2015．03．016 中图分类号： 文献标识码： D0l：10．3969／j．issn Protoplast and ofRhfzDctDn妇cP，℃nZfs preparationregeneration Dezhenl～，ChenXiaoxial，Gao Yu Zhang Xianyuel，Jinfen91 0，砌，tf 271018， (1．啦阳rrme，lf0厂Pf口nf砌f_ilo^昭)，，GDff昭ePrDfecff伽，跏，zdD愕船fc“fmmf【删比趟砂，死f’口凡 262700，劬i船) 既l眦；2．讹的馏咖fw捌砂D，fencen蒯乳c豇加fqgy，腑D“g幽愕 themain ofwheat orderto AbstIact尺矗f捌细厅谊鲫抛凰is inChina．In obtain pathogen sharpeyespot hi曲-qual— forthetraIlsformationofR晟fzDcf饥妇∞n∞凰，thefactors of尺．cPr∞胁 ityprotoplasts illfluencingpreparation were resultsshowedthatthesuitable wereasfol· studied．The conditionsfor protoplasts protoplastpreparation of6 mixtureof15 and10 at30℃for4 hThe d，a lowed：mycelia mg／mLlywalIzymemg／mLsnailase，digested reached3．O×106