脂氧合酶催化双高-γ-亚麻酸脂质过氧化产生的碳自由基的结构确证.pdfVIP

分析化学(FENXI 第12期 第37卷 HUAXUE)研究简报 of 1815—1819 ChineseJournal 2009年12月 AnalyticalChemistry 脂氧合酶催化双高-妒亚麻酸脂质过氧化 产生的碳自由基的结构确证 Steven 于清峰1，2 肖莹1 倪坤仪1 Y．Qian也 ‘(中国药科大学分析化学教研室，南京210009) ofPharmaceutical DakotaState 2(Department Sciences，NorthUniversity，Fargo，ND，58108，USA) 摘要采用液相色谱一电子自旋共振波谱(I￡／ESR)联用技术、液相色谱．质谱(LC／MS)联用技术结合自旃 捕集技术，研究了脂氧合酶(LOX)催化双高一y一亚麻酸(DGLA)脂质过氧化过程中产生的碳自由基。以 加合物后，根据各加合物在LC／UV／ESR和If_,／MS中对应的保留时间，确定加合物的分子量，进一步根据方f 合物质谱裂解方式确定其结构。结果表明，在LOX催化DGLA脂质过氧化过程中产生的碳自由基主要包招 步研究DGLA在体内的脂质过氧化过程及该过程中产生的碳自由基的生理作用。 关键词 双高-T．亚麻酸，脂质过氧化，自旋捕集，液相色谱一电子自旋共振彼谱联用，液相色谱一质谱联用 l 引 言 合物具有抗炎、抗血小板聚集旧1等功能。DGLA本身还具有抗高血压、抗过敏p1等作用。 o，可能是通 研究表明，GLA的一些作用，如抗过敏、对异位性湿疹和尿毒性搔痒症的治疗作用等M’5 过其代谢物，即DGLA和PG．而发挥的。体外细胞实验表明，DGLA可以减少脂多糖刺激下炎症因子的 这些作用可能与DGLA的脂质过氧化有关。脂质过氧化是由自由基介导的链式反应，该过程中产生的 自由基在许多疾病进程中具有重要作用。由于分析方法的限制，对DGLA脂质过氧化过程中产生自由 基的研究还未见报道。为进一步研究LOX催化DGLA脂质过氧化过程中产生的自由基的生理作用，首 先需确认该反应中产生了何种自由基。 本研究采用自旋捕集技术，以口．[4．吡啶基一I．氧]一^乙叔丁基氮酮(POBN)为捕集剂，反应过程中与 碳自由基形成自旋加合物，延长了碳自由基的寿命。然后采用液相色谱一电子自旋共振波谱(LC／ESR)、 中产生的碳自由基的生理作用。 2实验部分 2．1仪器与试剂 1200液相色谱系统、6300离子阱质谱仪(Agilent公司)；BrukerEMX电子自旋共振波谱仪(Bruker 公司)，恒温振荡器(Boekel公司)；BeckmanMicrofugeR 5301真 2009-05-28收稿；2009-08-21接受 ·E-mail：steven．qian@ndsu．edu 万方数据万方数据 1816 分析化学 第37卷 空浓缩机(Eppendorf公司)。 无水乙醇、冰醋酸、大豆脂氧合酶(LOX，Type a一[4一吡啶基．1．氧]．Ⅳ-叔丁基氮酮(POBN，Alexis Iso— topes公司)；Chelex Baker公司)和 水(LC—MS级，MDChemicals公司)。 2．2反应条件