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細菌細胞觀察 劉佩珊 在口腔中唾液含有水分、胺基酸、蛋白質、脂質、醣類及一些無機物，因此適合菌體生長。 牙齒表面亦會有大量菌體存在形成牙菌斑。 主要菌群為厭氣性螺旋體與弧菌、葡萄球菌、乳酸桿菌及鏈球菌 乳酸桿菌及鏈球菌附著於齒面上，可醱酵醣類產生乳酸，造成牙齒脫鈣作用，進而形成細微穿孔導致齵齒。 本實驗以牙籤採集口腔及牙齒面檢體，並藉由簡單的染色來觀察口腔中的細菌。 口腔中微生物菌叢之觀察 鼻腔中金黃葡萄球菌（Staphylococcus aureus）之鑑定 天然存在人體的微生物稱為正常菌群 在鼻腔中主要菌群為金黃葡萄球菌及表皮葡萄球菌 MSA含高濃度鹽類，可抑制葡萄球菌屬以外之微生物生長 MSA含甘露醇（mannitol），經醱酵產酸後，可經由酚紅（phenol red）顯示pH值之改變 金黃葡萄球菌能醱酵甘露醇，使菌落周圍呈黃色，表皮葡萄球菌不醱酵甘露醇，顏色不改變。 細菌簡單染色 染劑（ Stains ） 鹼性染劑 －正電荷染色原 －甲烯藍、結晶紫、石炭酸複紅 酸性染劑 －負電荷染色原 －伊紅、苯胺黑 簡單染色（ Simple stains ） 使用單一染劑 使用鹼性染劑（正電荷） 觀察細菌形狀（球狀、桿狀、螺旋狀）、大小、排列情形（成鏈、成簇、成對、四聯） 甲烯藍（1-2分鐘）、結晶紫（20-60秒）、石炭酸複紅（15-30秒） 製備染色抹片 準備乾淨之載玻片 自肉湯培養或固體培養製備抹片 熱固定 － 過火數次或浸泡於甲醇中一分鐘 簡單染色步驟 將菌製備成抹片，各抹片於染色前需先經過熱固定。 將玻片置於染色盤上，覆以染色液，並注意適宜之染色時間。 以蒸餾水尖嘴瓶小心沖去過剩染色液，此時玻片應與水流成平行，如此可減少微生物自抹片中流失。 以吸水紙吸乾抹片，切勿揩拭。 以油鏡觀察抹片。 簡單染色– S. aureus * * 口腔中微生物菌叢之觀察 蓋玻片一端滴加一滴methylene blue染劑（圖D） 以吸水紙由另一端將水吸出（圖E） 以無菌棉棒伸進鼻孔約2.5公分，輕輕旋轉棉棒使之與鼻孔黏膜接觸。 壓舌板壓住舌頭，以無菌棉棒於咽喉表面充分旋轉，採集檢體。勿觸及舌頭。 將採樣的棉棒直接以鋸齒狀劃線接種於MSA plate上。 表皮葡萄球菌 大腸桿菌 鏈球菌 金黃葡萄球菌 簡單染色– B.cereus
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