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A.准备的试剂和材料:
CTAB抽提缓冲液:2%CTAB,1.4M NaCl,100mM Tris-HCl pH 8.0,20mM EDTA pH 8.0,1%PVP,2% 巯基乙醇(使用前加入)
其他试剂:苯酚氯仿异戊醇(2524:1)
氯仿异戊醇(241)
RNaseA 10mg/ml
乙醇/异丙醇ml离心管中;
加入65℃预热的DNA提取液700μl,轻磨混匀,将匀浆液倒入相应编号的2ml离心管中;
离心管置65℃水浴锅中保温1 h,期间上下颠充分混匀溶液,前半小时隔10min摇动一次,后半小时每15min摇动一次;
取出DNA样品冷却至室温,加入800μl的混合液(苯酚:氯仿:异戊醇25:24:1)12000 r/min离心15 min,吸取上清液通过擦镜纸过滤到新的1.5 ml离心管中;
加入等体积混合液(氯仿:异戊醇24:1)12000 r/min离心15 min,用枪吸取上清到相应编号的1.5 ml离心管中;
加入2倍体积无水乙醇,轻轻颠倒混匀,于-20℃静置40分钟以沉淀DNA;
12000 r/min离心10 min,去上清,再加入500 μl预冷的75%乙醇洗涤沉淀,去上清,将两管沉淀合到一管1.5 ml离心管中,晾干或者用冷冻干燥机抽干(约2分钟);
加入100ul的ddH2O溶解DNA,再加入0.3% RNase A去除DNA中的RNA,于37℃静置1h,4℃过夜;(2毫升的水,加酶6微升)
用等体积混合液(氯仿:异戊醇24:1)
2
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