流式细胞仪新发展.docVIP

临床流式细胞分析的发展方向和趋势 检验医学 2010-03-03 22:01:25 阅读39 评论0 ??字号：大中小?订阅 ? 流式细胞分析（Flow cytometry，FCM）是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞（或微粒）的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术，它具有如下几个特点：标本只要是单细胞即可用于分析，如血液、骨髓、体液中的细胞、培养细胞等，实体组织只要经处理后制成单细胞悬液也能分析，因此，实际上所有组织细胞均可用于分析。极短时间内可分析大量细胞，只要标本中的细胞数量足够，流式细胞仪（Flow cytometer）可以每秒钟数十、数百、数千个细胞的速率进行测量，测量的细胞总数可达数千、数万乃至数百万个。可同时分析单个细胞的多种特征，当同时用多种分子探针，如用不同荧光素标记的不同单克隆抗体进行多色荧光染色，通过流式细胞分析，即可获得单细胞的多种信息，使细胞亚群的识别、计数更为准确。定性或定量分析细胞：通过荧光染色对单细胞的某些成分如DNA含量、抗原或受体表达量、Ca2+浓度、酶活性、细胞的功能等均可进行单细胞水平的定性与定量分析。 　　由上述几个主要特点可知，FCM是一种在医学基础、临床及科学研究中有着广泛的应用前景的细胞分析技术，尤其是随着人类基因组计划完成后，流式细胞分析在单细胞水平研究基因的表达、调控及功能等也将有着更广泛的应用。近年来，随着流式细胞仪性能的不断改进和测定方法与技术的迅速发展，流式细胞仪迅速进入临床实验室，临床流式细胞分析（Clinical flow cytometry）在临床检验医学中的应用范围不断拓宽，一些检验项目已成为临床疾病诊断、治疗方案选择、预后判断等不可缺少的内容。 　　当前，临床流式细胞分析已成为检验医学发展的一个热点，其发展趋势主要体现在以下几个方面。? 一．从相对细胞计数到绝对细胞计数 　　流式细胞分析最大的优点是对混合细胞群体中亚群细胞的计数，如淋巴细胞可依其表面标志的不同分为T淋巴细胞（CD3+）、B淋巴细胞（CD19+）、NK细胞（CD16+56+/CD3-），T淋巴细胞又可进一步分为辅助/诱导T淋巴细胞（CD3+CD4+CD8-）和抑制/细胞毒T 淋巴细胞（CD3+CD4-CD8+）等。这些亚群细胞计数过去多以相对百分比表达结果，由于百分比只能代表每种细胞在混合细胞群体中所占的比例，并不能体现在单位体积血液中的绝对数量，而现在临床一些疾病的诊断需要考虑细胞的绝对数量，如艾滋病患者的血液中辅助/诱导T细胞（CD3+CD4+CD8-）＜200个/μL，而仅有HIV感染而未发病者的＞200个/μL。T淋巴细胞亚群的绝对计数在国外实验室早已成为常规检查，而国内仅有少数实验室开展。 　　流式细胞绝对计数在临床可开展的项目包括：淋巴细胞亚群，尤其是T淋巴细胞亚群的绝对计数。外周血或骨髓中造血干/祖细胞的绝对计数。血液中网织红细胞的绝对计数。血液中血小板数量，尤其是血小板减少症患者血小板的绝对计数，此种计数优于血细胞分析仪法，已成为血小板计数的国际推荐参考方法。此外，可能出现在血液中的其它一些稀少细胞（如内皮细胞、转移的肿瘤细胞等）的计数，也将发展为流式细胞绝对计数。流式细胞绝对计数的开展对临床疾病的诊断、治疗等有重要意义。 二．从相对定量到绝对定量分析 　　细胞的多种成分如某些抗原或受体表达的流式细胞分析，以前多以平均荧光强度（MFI）或相对荧光强度（RFI）表达其含量。由于流式细胞仪每次的仪器状况可出现差异，每个实验室所用仪器的类型也不尽相同，以MFI或RFI表示某些细胞的抗原或受体的表达量缺乏可比性，虽然流式细胞仪有极高的荧光灵敏度，但却无法准确应用这些信息。近年来，为了通过FCM精确定量分析细胞的某些成分，定量流式细胞术（Quantitative flow cytometry，QFCM）逐渐得到发展，其定量分析原理主要有两种：定量抗体微球法：在特制的微球上包被已知分子数的羊抗鼠IgG分子，再将包被不同分子数的微球混合，形成含不同羊抗鼠IgG分子数的混合微球，此微球与待测标本在相同条件下与荧光素标记的单克隆抗体（McAb）反应后在流式细胞仪上测定其荧光强度，根据微球上所包被的羊抗鼠IgG分子数和与之对应的对数荧光强度计算回归方程，再将待测样本中阳性细胞的对数荧光强度代入方程即可求得其每个细胞上的平均抗原分子数（抗原结合位点数）。定量荧光素分子微球法：在特制的微球上直接包被荧光素分子，再将包被不同分子数的微球混合，形成含不同数量荧光素分子的混合微球。在流式细胞仪仪器设置相同的条件下测定此微球及待测细胞的荧光强度，根据微球上所包被的荧