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实验三:多条序列比对——Clustalx
实习目的:了解掌握Clustalx软件的应用,学会做多条序列比对并分析。
实习内容:
一、ClustalX的使用
Clustal是一种利用渐近法(progressive alignment)进行多条序列比对的软件。即从多条序列中最相似(距离最近)的两条序列开始比对,按照各个序列在进化树上的位置,由近及远的将其它序列依次加入到最终的比对结果。
准备要比对的序列
请查找至少存在于5个物种中的同源序列(核酸或蛋白质皆可),并保存为fasta格式,存为文本文件(所有的序列请粘贴到同一个文本文件中)。选择NM、XM或NP打头的序列,不要选择NC或NW打头的序列,那是全基因组序列。
建议关键词:hemoglobin,trypsin, peroxidase, p53, Superoxide Dismutase, h5n1, etc.)Clustalx产生的guide tree(即后缀为dnd文件),可以通过treeview软件浏览。
解压缩并安装treev32.rar文件。双击后缀为dnd文件,选择treeview程序打开即可。
作业:
Clustalx是多条序列比对软件,为什么需要设置两条序列比对的参数?
答:Clustal是一种利用渐近法(progressive alignment)进行多条序列比对的软件。即从多条序列中最相似(距离最近)的两条序列开始比对,按照各个序列在进化树上的位置,由近及远的将其它序列依次加入到最终的比对结果,既是采用两两比较后再继续进行比较的方法,所以,需要设置两条序列比对的参数。
利用entrez或srs搜索来自于不同物种的同源序列(othologs),利用clustalX进行比对,给出所选序列简要信息(fasta格式第一行),比对所用的参数,比对过程中产生的guide tree(dnd文件),并分析比对结果(序列之间相似度关系,保守位点所在位置等)。
答:简要信息:
gigb|AF349413.3| Danio rerio estrogen receptor beta b mRNA, complete cds
gi|145308317|gb|EF530592.1| Paramisgurnus dabryanus estrogen receptor beta mRNA, partial cds
gigb|AY305027.1| Halichoeres tenuispinis estrogen receptor beta mRNA, complete cds
gi|2073112|dbj|AB003356.1| Anguilla japonica mRNA for estrogen receptor, complete cds
giref|NW_925528.1| Homo sapiens chromosome 14 genomic contig, alternate assembly (based on Celera), whole genome shotgun sequence
giemb|AJ314602.1| Candidia barbatus mRNA for putative estrogen receptor
gidbj|AB190290.1| Rutilus rutilus ERb mRNA for estrogen receptor beta, complete cds
比对所用参数:
Guide tree:
比对结果见附表1:
附表1:
Candidia TATCACTATGGTGTCTGGTCATGTG---AGGGATGCAAGGCT---------TTTTTCAAA
Rutilus TATCACTATGGTGTCTGGTCATGTG---AGGGGTGCAAGGCT---------TTCTTCAAA
Danio TATCACTATGGTGTCTGGTCATGTG---AAGGGTGCAAGGCT---------TTCTTCAAG
Paramisgurnus TATCACTACGGGGTGTGGTCATGCG---AGGGGTGCAAGGCT---------TTCTTCAAA
Halichoeres TATCACTACGGTGTGTGGTCCTGCG---AGGGCTGTAAAGCA---------TTTTTCAAG
Anguilla TATCACTACGGGGTGTGGTCCTGCG---AAGGCTGCAAGGCC------
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