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第13章 DNA的生物合成—复制 核酸的化学组成 核酸的水解 核 苷 核苷酸 核苷酸的磷酸化 核苷一磷酸 （ NMP ） 核苷二磷酸 （ NDP ） 核苷三磷酸 （ NTP ） 环状腺苷酸 （cAMP） 5’ 核酸的一般理化性质 （1）DNA微溶于水，呈酸性，加碱促进溶解， 但不溶于有机溶剂； （2）核酸和蛋白质一样具有变性现象；而且变 性DNA，在适当的条件下也可复性； （3）由于核酸组成中的嘌呤、嘧啶碱都具有共 轭双键，因此对紫外光有强烈的吸收，核酸溶液在 260nm 附近有一个最大吸收值； （4）DNA的变性和复性都是以碱基互补为基础 的，因此可以进行分子杂交。 生物遗传信息传递的中心法则 一、DNA的生物合成 （一）DNA的复制方式 （二）参与DNA生物合成的酶 （三）以DNA为模板合成DNA的过程 （四）DNA损伤与修复 （五）以RNA为模板合成DNA的过程 半保留复制 半保留复制的意义 子代 DNA 保留了亲代 DNA 的全部遗传信息，保证了遗传信息的相对稳定，是物种稳定性的分子基础。 （二）参与DNA生物合成的酶 1.DNA 聚合酶 2.DNA 分子的拓扑学变化和相关酶 3.引物酶 4.DNA 连接酶 1. DNA聚合酶 以 DNA 聚合酶 I 为代表说明三个酶的共性: （1）是一个模板指导酶； （2）聚合需要引物； （3）具有水解作用。 即需要打开的 DNA 单链作为模板才能合成子链。 底物为 4 种脱氧核苷三磷酸（dATP、dGTP、dTTP 和 dCTP）。 DNA 聚合酶Ⅰ只能将脱氧核苷酸加于已存在的DNA 或 RNA 链的 3’-羟基上，否则不能合成。 这是一个耗能反应，每合成一个核苷酸消耗 2 分子ATP。聚合反应延着 5’→3’方向进行。 （3）具有水解作用 3’→5’外切活性作用：复制“校对”作用。 5’→3’外切活性作用：从 5’端切去引物 RNA 的功能。 大肠杆菌体内各聚合酶作用 DNA 聚合酶 Ⅲ 是复制时的主要聚合酶； DNA 聚合酶 I 主要负责除去引物并利用脱氧核苷酸填满空隙； DNA 聚合酶Ⅱ 作用尚不清楚。 DNA 聚合酶Ⅳ和Ⅴ 涉及DNA错误修复。 它至少由 8 种亚基组成，每秒钟聚合 1 000 多个核苷酸。 许多亚基的功能目前还不清楚，已知聚合催化活性位于α亚基； 两个β亚基夹住 DNA 模板并沿链滑动，从而提高全酶聚合的工作能力； 3’→5’核酸外切酶活性位于ε亚基。 聚合酶Ⅲ全酶形成一个对称的二聚体，这种结构使复制的先导链及随后链在全酶上同时、同方向合成。 真核生物的 DNA 聚合酶 真核生物 DNA 聚合酶现已发现至少有5种，分别称为 DNA-polα、β、γ、δ、ε。 DNA-polα和δ都是在复制延长中起催化作用。 DNA-polε则与原核生物的 DNA-pol I相似，在复制过程中起校读、修复和填补缺口的作用。 2. DNA 分子的拓扑学变化和相关酶 （1）解螺旋酶 （2）DNA 拓扑异构酶 （3）单链 DNA 结合蛋白 （1）解螺旋酶 一种称为解螺旋酶Ⅱ或解螺旋酶Ⅲ； 一种称为 Rep 蛋白。 （2）DNA拓扑异构酶 真核生物中 TopoⅠ不需消耗 ATP，它能使负或正超螺旋变为松驰态。 TopoⅡ 的存在需要 ATP 供能，原核生物中又称 DNA 解旋酶（DNA gyrase）。 （3）单链 DNA 结合蛋白 与解开的单链 DNA 结合，防止其重新配对形成双链 DNA 或被核酸酶降解。 所有的 DNA 聚合酶都要求一个有自由 3’-OH 的引物来起始 DNA 的合成。 这段 RNA 长 5～10 个核苷酸，由一种特异的 RNA 聚合酶合成