抗生素类药物生物利用度和生物等效性试验需关注的问题.docVIP

发布日期 栏目 化药药物评价综合评价 标题 抗生素类药物生物利用度和生物等效性试验需关注的问题 作者 审评三部 部门 审评三部 正文内容 ????? 生物等效性研究是药物制剂研究的重要组成部分。FDA、ICH等均颁布了该部分研究以及相关的技术指导原则，我国也于2005年3月颁布了《化学药物制剂人体生物利用度和生物等效性研究技术指导原则》。该指导原则指出：生物利用度（Bioavailability BA）是反映药物活性成分吸收进入体内的程度和速度的指标。生物等效性是指药学等效制剂或可替换药物在相同试验条件下，服用相同剂量，其活性成分吸收程度和速度的差异无统计学意义。在仿制生产已上市口服制剂时，需要通过BE研究来证明仿制产品与原创药是否具有生物等效性。????? 通过上述表述内容可以看出，仿制药进行生物等效性试验的目的是：证实仿制药与原创药是否具有生物等效，其具体方法是通过比较两种制剂的吸收程度和吸收速度是否一致。????? 常见的测定方法包括：1、色谱法：气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、色谱-质谱联用法（LC－MS、LC-MS-MS、GC-MS、GC-MS-MS）等；2、免疫学方法：放射免疫分析法、酶免疫分析法、荧光免疫分析法等，多用于蛋白质多肽类物质检测；3、微生物学方法，可用于抗生素类药物的测定。????? 对于抗生素类药物，目前最常使用的方法是高效液相色谱法以及色谱-质谱联用法，也有个别企业采用微生物法进行分析，在采用微生物法进行分析时，建议关注以下内容：????? 1、生物等效性研究目的????? 色谱法及其联用法测定的是药物本身的浓度，具有较高的选择性。微生物法测定的是样品对敏感菌株的抑菌活性，然后再将其转化为药物浓度，将其转化为浓度时，可能受到血浆蛋白结合、活性代谢物等因素的影响。????? 由于抗生素类药物的工艺及降解杂质、体内代谢物等仍可能有抑菌活性，所以试验测定结果选择性低，不仅包括药物的抑菌活性，还包括工艺及降解杂质、体内代谢物的抑菌活性，并能体现蛋白结合等其他信息。即微生物法的试验结果体现了药物体内的综合情况，并不能完全精准地反映药物的吸收情况，即并非准确反映药代动力学（PK），而在一定程度上体现了药效动力学（PD）。????? 比如：文献显示，罗红霉素（E-Rox）在尿中可检出4种代谢物，分别为E-Rox的N-去甲基和N-双去甲基衍生物、罗红霉素脱克拉定糖衍生物及红霉素肟。另外，红霉素肟醚类衍生物具有Z型和E型两种异构体，E-Rox属E构型，其体内抗菌活性是Z型异构体的3倍。研究显示：在人尿样中Z，E两种构型的异构体都存在。E-Rox在人体内除代谢生成4种代谢物外，还生成Z型代谢产物(Z-Rox)。因此，如果采用微生物法进行分析时，实际上是测定了罗红霉素、4种代谢物以及代谢产生的Z型异构体的合并信息；而且随着药物的不断分布与代谢，体内药物与上述5种代谢物的浓度在不断变化和平衡，由此采用微生物法的试验结果无法精准有效地反映罗红霉素（E-Rox）本身的吸收程度和吸收速度。????? 另外，指导原则指出在无可行的药代动力学研究方法建立生物等效性研究时（如无灵敏的血药浓度检测方法、浓度和效应之间不存在线性相关），可以考虑用明确的可分级定量的人体药效学指标通过效应-时间曲线（Effect-Time curve）与参比制剂比较来确定生物等效性。目前，绝大多数抗生素类药物均有比较成熟的、专属性高、灵敏可靠的色谱法或色谱-质谱联用法测定生物样品浓度，在这种情况下，一般建议采用专属性更好的方法测定生物样品浓度。????? 当然，临床治疗过程中采用微生物法进行血药浓度监测，仍然是可选的方法。????? 2、与色谱法或色谱-质谱联用法相比，微生物法测定更容易受到影响????? 微生物法测定的是样品对敏感菌株的抑菌活性，将其转化为浓度时，可能受到血浆蛋白结合、活性代谢物等因素的影响。另外，微生物法测定也易受合并应用其他抗生素的影响，当受试者有合并应用其他抗生素时，该方法就更无法准确反映被测药物的生物样品浓度。????? 微生物法测定影响因素多，方法变异大。文献显示工作菌液浓度、培养基的温度、操作时间、药物的溶解介质等因素对于实验结果均可造成较大影响，与色谱法相比，操作中引入的人为因素更大。另外，微生物法在高浓度范围内有抑菌饱和趋势，提示采用微生物法测定时线性范围不宜设定过宽，因此在试验过程中更易受限。????? 3、数据难以保存和回溯??????与色谱法相比，微生物法的实验数据更难以保存和回溯，如果试验出现问题，也难以重新进行分析，查找试验的问题。这种情况，也不利于监管。????? 综合上述原因，建议申请人在研发口服抗生素类药物进行生物等效性研究时，注意选