实验三 沉淀反应.pptVIP

沉淀反应类型 ① 环状沉淀反应：最早使用的沉淀反应 ② 以琼脂为支架的扩散反应：单扩，双扩 ③ 在扩散的基础上加上电泳：火箭电泳；对流免疫电泳；微量免疫电泳 一、环状沉淀反应 二、 琼脂扩散 (1)单向琼脂扩散（单扩） (2)双向琼脂扩散 三、 扩散的基础上进行电泳 优点：提高反应敏感度，缩短反应时间。 抗原抗体在电场中能定向移动，既限制了抗原抗体向四周扩散，增加局部反应浓度，又加快泳动速度，从而缩短反应时间（1-2h即可），提高反应敏感度（10倍）。 ⑴ 火箭电泳 单扩+电泳 ⑵ 对流免疫电泳 双扩+电泳 ⑶ 微量免疫电泳 先电泳后扩散 操作步骤 用蜡笔在一洁净的载玻片中央1/3上划区，并作好标记 制备琼脂板：将玻片平放于水泥平台上，用吸管吸足量琼脂，沿划区边缘快速一次性加入，形成厚约3mm的琼脂板，放置1-2分钟使之凝固。（***避免产生气泡、分层及厚薄不均） 琼脂板凝固后依模板打孔 加样： 原则：每孔10ul、加满孔、不含气泡、不溢出，每孔加样量要准确均一 微量移液器的使用：各个微量移液器与相应血清一一对应，不混用；吸液时下压有阻力即可，放液时须压到底。 加样完置湿盒过夜后观察结果。 注意事项 加样前判断孔内的琼脂是否已取出 加样时注意不要刮破琼脂以免影响沉淀线形状 加样时抗体、阳性血清及待测标本应各用一支加样器，以免混淆，影响实验结果 附：沉淀线形状与抗原、抗体浓度的关系 * * 抗人血清 抗牛血清 待检血稀释液 人血稀释液 人血稀释液 待检血稀释液 抗牛血清 抗人血清 意义： 可检测小量的抗原进行法医学上血迹的鉴定 及流行病学中昆虫吸血习性的检查。其缺点是对含几个抗原抗体系统的反应缺乏分辨作用。 意义：用于定量测定人或动物血清中各种Ig( IgD、IgE除外）的含量。 不同稀释度的Ag 已知Ab 已知Ab 未知Ag 不同稀释度Ag 已知Ab融于琼脂板 意义： 用于制作不同稀释度αFP含量的标准曲线，测定病人血清中αFP含量。 已知Ab 未知Ag 意义： 用于HBsAg、αFP检测及脑膜炎球菌分型检测。 Ag接电源负极，Ab接电泳正极 病人血清 正常人血清 已知Ab 意义：用于免疫球蛋白不同成分的鉴定。 血清蛋白电泳示意图 图7-1 电泳和双扩散不同阶段示意图 Ⅰ 电泳后各蛋白质的位置 Ⅱ 加抗体后双扩散的情况 Ⅲ 双扩散结果 1 3 2 6 5 4 中央孔——αFP诊断血清 1，4——阳性对照 2 ——阳性病人血清（原液） 3 ——阳性病人血清（1：10） 5 ——阴性病人血清（原液） 6 ——阴性病人血清（1：10） 1 [实验内容]：双扩 按图示加样 实验报告 双扩的实验原理、结果、结果分析 使用时，直接删除本页！ 精品课件，你值得拥有！ 精品课件，你值得拥有！ 使用时，直接删除本页！ 精品课件，你值得拥有！ 精品课件，你值得拥有！ 使用时，直接删除本页！ 精品课件，你值得拥有！ 精品课件，你值得拥有！ Ab 表示Ag与Ab的分子量大小适中、浓度适宜 表示Ag的浓度大于Ab 表示Ab浓度的大于Ag *