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蛋白激酶C在预处理脑保护中的作用 纪方 刘雅 桑本玲 （首都医科大学附属北京同仁医院麻醉科100730） 【摘要】 应用预处理方法进行脑保护是近年脑保护研究的热点，其中蛋白激酶C(PKC)可能起关键作用。目前研究表明，PKC的某些亚型作为细胞信号传导通路的一部分介导了缺血/再灌注引起的脑损伤。我们的研究提示PKC（ε、γ）参与了吗啡预处理诱导的早期脑缺氧耐受。对PKC在预处理脑保护中作用的深入研究有可能为探索脑保护的新方法提供科学依据。 围术期脑缺血缺氧损伤的预防是临床麻醉面临的重要课题。传统方法如低温、脱水、降低脑代谢药物的应用等的疗效与应用范围均有限。对缺氧预处理保护现象的发现和深入研究表明，预处理有可能成为探索脑保护方法的新途径。预处理方法可分为缺血（低氧）与非缺血（低氧）两大类。某些药物（如吗啡等）可替代缺血/低氧刺激产生与缺血预处理类似的脑保护作用,称为“药物预处理”。虽然其确切机制目前仍不完全清楚，但多数研究表明蛋白激酶C在预处理脑保护过程中可能起关键作用。现就相关问题综述如下。 一．蛋白激酶C概述 1． 蛋白激酶C同工酶的分类及分布 2.PKC的激活 PKC通常以钝化形式存在于细胞浆中，静息细胞内的DAG不足以活化PKC。当细胞受外界信号刺激后，细胞膜上的磷脂酶C把磷脂酰肌醇－4，5－二磷酸分解成溶于水的1，4，5－三磷酸肌醇和留在膜上的DAG。膜上的DAG增多引起PKC从胞浆转位到细胞膜上。PKC只有与膜相连并与DAG结合才能活化。 二．PKC参与预处理脑保护的证据 预处理保护作用机制在不同的器官可能不完全相同。在脑组织，PKC不同亚型的激活或者被抑制都有产生保护作用的证据，这与研究脑保护的模型不同有关，也可能与PKC不同的亚型在细胞内执行不同的功能或对激活剂和抑制剂的亲和力不同有关。 1. cPKCγ ???????PKCγ亚型是神经组织特有的，在其它组织中没有表达，在神经组织缺血损伤中发挥重要作用。缺血后，PKCγ被迅速激活，同时细胞内Ca2+浓度增加，磷脂代谢增加进一步活化PKCγ。 2.nPKC( PKC(在调节脑缺血再灌注过程，尤其是氧化应激、凋亡和炎性反应中发挥关键作用。缺血再灌注时，ATP水平降低，过氧化产物增加，对过氧化自由基和其他凋亡介质敏感，继而发生转位激活，激活的反过来又促进过氧化自由基的产生，抑制线粒体功能。关于 2.NMDA受体 NMDA受体是谷氨酸受体的一种，在缺血缺氧损伤及神经退行性疾病中发挥重要作用。近来研究表明，NMDA受体在预处理脑保护中也起重要作用。 3.Ca2+ 生理条件下，Ca2+通过ATP酶的活性保持在一个相对稳定的状态。在预处理后，缺血期间加入Ca2+螯合剂，能消除缺血和NMDA预处理诱导的脑缺血耐受。 5. 氧自由基 现已明确，氧自由基是预处理保护作用的关键成分。在兔心脏预处理模型中发现，再灌注最初的几分钟内给予自由基清除剂，可以完全阻断预处理的保护作用。同时期给予PKC激动剂佛波酯能够使心肌梗死面积减少，而自由基清除剂并不能阻断这一效应，证明预处理的保护效应发生在再灌注早期，而自由基的产生发生在PKC激活的上游。 6.丝裂原激活蛋白激酶（MAPKs）家族 丝裂原激活蛋白激酶（MAPKs）家族是一组广泛分布于真核细胞内，具有使蛋白质分子内丝氨酸/苏氨酸残基磷酸化的蛋白激酶，是细胞外信号引起细胞核反应的共同通路。实验证实ERK、JNK和P38可能参与组成了预处理的下游通路。四应用离体培养的大鼠新皮质神经元发现阿片类物质通过激活阿片δ受体减少了谷氨酸诱导的神经元坏死。Lim 等应用大鼠离体小脑脑片研究吗啡预处理诱导脑缺血耐受发现，这种保护作用是δ1受体依赖性的，能被选择性δ1受体阻断剂7－benzylidenenaltrexone所阻断，而不被μ、κ及δ2受体阻断剂所阻断。另有研究认为μ及κ受体也可能参与延迟相缺氧预适应脑保护作用。 我们用氧糖剥夺（OGD）小鼠海马脑片模型所做的的研究表明，吗啡预处理可诱导脑早期缺血/低氧耐受，δ1受体阻断剂可完全阻断这一保护作用，而μ、κ及δ2受体阻断剂对其无明显影响。在这一过程中，nPKCε的活性及膜转位均有变化，说明nPKCε参与了吗啡预处理产生的脑保护作用。 进一步分析PKC其它亚型参与这一过程的研究表明，cPKCγ的激活介导了缺氧引起的神经元死亡，而吗啡预处理可通过抑制其活性产生保护作用。其它PKC亚型（cPKCα、βⅠ、βⅡ）是否参与此过程则不能肯定[31]。