PCR鉴定时的微量DNA快速制备.pdfVIP

262 植物生理学通讯第42卷第2期，2006年4月 PCR鉴定时的微量DNA快速制备 陈书霞1姚莲芳2房玉林3，+ 萄酒学院，陕西杨凌712100 forIdenti6cationofDNAPCR QuickPreparation by C}玎BN Yu-Lin3+ Shu．Xial，YAoLiaIl·Fan92，FANG 7j2jDD， n理s慨y口，lgzfng，s_}l口口黻f 1cDZ妇PD，砌rffc“触鸺ⅣDmwP时＆fP，lcP＆死c砌DfDgy跏fVP揩毋矿Agrff“砌理以nd Chin8：2Dep口rtmemofHorlicHtture．HenmtConegeofsctence＆1echnotogMXinnmtg．Henan 对Enology．Nonhwest 712loo．ChtM 提要用基因组微量DNA快速提取方法，从胡萝卜转化再生株样品中快速提取了基因组DNA，并以此为模板进行胡萝 卜转化再生株的PcR快速检测的结果表明，这是转基因时PcR检测的一种快速、简便、有效方法。 关键词DNA提取方法；PcR检测；胡萝卜再生株；转基因植株鉴定 在以外源基因对植物的转化与表达的实验 基因研究的基础上，建立了一种适合于胡萝卜转 中，常需对转化的植物体进行初步检测。初步检 基因植株中检测用的DNA快速提取方法，并用其 测转化体为阳性时，才能迸一步作外源基因整 作了PCR检测，取得了比较满意的效果。 合、转录或翻译的检测。PCR技术具有操作简 材料与方法 便、灵敏度高的特点，在基因工程领域中己广泛 得到应用，尤其是在需要快速检出转基因植株时 1材料 常常用到PCR检测。PCR检测的前提是必须提取 胡萝卜(D口“c“Jc口rD施L．)品种有‘新透心红’ 93’、‘ACl 0 基因组DNA，在需要监测的转化体比较多时，如 和亲本材料‘AC l’，由北京市 何快速、简便、可靠地制备大量不同的植物个体 蔬菜研究中心胡萝卜育种研究室提供。实验所用 总DNA是快速检出转基因阳性株的关键。目前， 材料为转腹泻基因C阳及伽的胡萝卜愈伤组织 cm的小苗。 上再生的胚状体所长成的高约10 基因组DNA的提取方法很多，如SDS法(Pich和 Schubert 2方法 1993)、CTAB法(顾红雅和瞿礼嘉1998)、 2．1基因组微量DNA快速提取方法用1．5mL离 改良SDS法(江昌俊和陈彦1995)、尿素法(傅荣昭 心管压取两小片叶片，放入离心管的底部，加 等1994)、改良CTAB法(王晓武等1999)等。但 这些提取方法费时费力且纯化程序复杂，均不太 0．5m01．LJ的NaOH 用自制的玻璃研棒进行研磨，研磨至匀浆(该过程 适于与PCR相配套的转基因植株的微量DNA提 取。在转化植株量大而又没有报告基因可以利用 要求快速)，立即以13000×g离心lmin，取5“L 时，就要用快速提取的转化植株中的DNA进行 的上清液，转移至分别含有20、30、35、40、