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鸡蛋中卵球蛋白与卵清白蛋白的分离
一、实验目的
了解盐析分级分离蛋白质的基本原理及操作.
了解葡聚糖凝胶SephadexG-75分离蛋白质的基本原理和凝胶柱的制备及洗脱技术.
二、实验原理
盐析的原理:蛋白质是亲水胶体,在高浓度的中性盐影响下脱去水化层,同时,蛋白质分子所带的电荷被中和,结果蛋白质胶体的稳定性遭到破坏而沉淀析出。盐析不同的蛋白质所需中性盐浓度与蛋白质的种类及pH有关.分子量大的蛋白质(球蛋白)比分子量小(白蛋白)易析出。改变盐浓度,使不同分子量的蛋白质分别析出。
分子筛层析。
实验用品
仪器：752型紫外可见分光光度计、离心机、层析装置
器皿：5ml试管20支、50ml烧杯2个、试管架、玻棒、石英比色皿、玻璃层析柱
药品及材料：新鲜蛋清、固体硫酸铵、饱和硫酸铵溶液、凝胶SephadexG-75
实验步骤
1、卵球蛋白与卵清蛋白的初步盐析分离
取卵清２ml于试管中；加２ml的饱和硫酸铵溶液，搅拌均匀；静置２分钟；4000r/min离心５分钟；沉淀为卵球蛋白,量取取上清液，加入固体硫酸铵（计算3ml溶液饱和度由
５０％变化为１００％需要加入硫酸铵的克数1.5g）； 8000r/min,离心５分钟；
沉淀为卵清白蛋白。加入2ml蒸馏水溶解卵清白蛋白粗液。
2、 凝胶柱层析进一步分离
（1）湿装法装柱：老师演示
(2) 加样：用加样枪加入1毫升卵清蛋白粗液
（3）洗脱:用蒸馏水洗脱
(3) 收集与检测:
(4) 以洗脱体积为横坐标,吸光值为纵坐标,绘制洗脱曲线,将蛋白质溶液收集待用.
五、实验结果及分析
0 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 0 0.011 0.767 0.468 0.243 0.04 0.057 0.024 0.069 0.017 0.053 绘制洗脱曲线
Sheet3
Sheet2
Sheet1
Chart1
请密切关注以下精确的数据!!
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卵清白蛋白的分离和脱盐
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