模拟微重力对改良纤维蛋白胶软骨细胞复合物培养影响研究.pdf

9‘870‘ 中文摘要 运动损伤以及骨关节炎导致的关节软骨缺损、退变已严重影响运动成绩和 生活质量，而修复、重建缺损的关节软骨一直是困扰创伤骨科和矫形外科的难 题。近年来，组织工程学发展，使体外构建组织工程化软骨成为可能，为修复、 重建关节软骨缺损开辟了新途径。由于关节软骨组织在体内所处的力学环境对 其生长、发育和功能的维持有着重要的作用，因此，寻找最优的体外培养环境 来提高工程化软骨的质量，使其更接近于天然软骨，成为目前研究的热点。 目的：本实验通过利用旋转培养仪进行软骨细胞模拟微重力培养，观察模拟微 重力对软骨细胞．改良纤维蛋白胶支架复合物构建的影响，为更好修复、重建关 节软骨缺损提供实验依据。 方法：1．取3周龄新西兰白兔膝关节软骨进行单层培养扩增，收集4代以内的 软骨细胞作为种子细胞。2．在纤维蛋白胶中加入适宜比例的纤溶酶抑制剂(抑肽 酶、氨甲环酸)制备改良纤维蛋白胶支架。3．将种子细胞以1xld6／ml密度接种 于支架内，构建软骨细胞．改良纤维蛋白胶支架复合物。4．将复合物分成两组： 旋转培养组和静态对照组。旋转培养组利用旋转培养仪进行模拟微重力培养； 静态对照组在12孔板中静止培养，均连续培养3周。5．在3周内，每组各取 样本分别进行大体和组织学观察(HE染色、阿利新蓝染色)、生化含量测定(DNA、 GAG)和II型胶原免疫组化检测，观察模拟微重力对改良纤维蛋白胶软骨细胞复 合物培养的影响。 、 结果：1．采用改良支架的复合物经体外培养3周，基本保持了复合物大小和形 状，经组织学及II型胶原免疫组化检测，显示有大量软骨细胞生成，细胞周围 有酸性粘多糖沉积和特异性II型胶原表达，软骨组织长势良好。2．相对于静态 培养组，模拟微重力能刺激旋转培养组DNA、GAG的合成量增加，并在第3 周出现显著性差异。显示模拟微重力环境下培养的软骨细胞一改良纤维蛋白胶支 架复合物质量较好。 结论：1．经过改良的纤维蛋白胶支架，其降解速率与软骨组织基质形成同步， 能长时间支持体外软骨组织的形成，并适合旋转培养，是软骨组织工程中适宜 的支架。2．旋转培养仪提供的模拟微重力环境，可以提高工程化软骨的质量。 由于这种培养环境类似于组织在体内环境，因而细胞能得到高密度生长并分泌 基质。伴随寻求最优化的体外培养环境，旋转培养仪将成为生产组织工程化软 骨极具潜力的选择，该技术也为实现关节软骨损伤的修复提供有效途径。 关键词：软骨组织工程，改良纤维蛋白胶，旋转培养仪，模拟微重力 Abstractin English Anjcular iscommonjn andosteoanhritjsthat cartilagedam鸱e sportsiniurv affect and and the severelv， restore pe—-0mlancesliving however，repair d枷aEe the and the oftissue alwayspuzzledtraumatologyonhopedics．Wjthdevelopment construct inVitrocome this engineering，aIldtissue—en酉neeredcanilage tnle， a for andrestoration．ItisweUknow provjdospromisingapproach repair