氨基酸的分离鉴定―纸层析法.pptVIP

氨基酸的分离鉴定―纸层析法 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。以水（被滤纸纤维结合）作为固定相，以有机溶剂为流动相，样品点在滤纸上进行展层，氨基酸在两相中不断分配，因为分配系数不同，故样品随流动相移动的速率不同，从而被分开，形成距原点距离不等的层析点。 氨基酸被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移)来表示的： Rf = 原点到层析中心的距离 / 原点到溶剂前沿的距离 1、层析缸 2、毛细管 3、喷雾器 4、培养皿 5、层析滤纸(新华一号) 6、烘箱 7、铅笔（直尺） 8、裁纸刀 9、胶带 10、分液漏斗 11、吹风机 1、氨基酸溶液 0.5％的赖氨酸、亮氨酸、脯氨酸、缬氨酸溶液及它们的混合液(各组份浓度均为0.5％)。 2、扩展剂 4份水饱和的正丁醇和1份醋酸的混合物。将20 mL正丁醇和5 mL冰醋酸放人分液漏斗中，与15mL水混合，充分振荡，静置后分层放出下层水层。 3、显色剂 0.1％水合茚三酮正丁醇溶液。 1平衡 将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。 2准备滤纸 取层析滤纸(长22 cm、宽14 cm)一张。纸的窄边朝下，距下端2 cm处用铅笔划一条与底边平行的直线，在此直线上每间隔2cm作一记号（×）。 3点样 用毛细管将各氨基酸样品分别点在中间5个记号（×）上，吹干后再点一次。每点在纸上扩散的直径，最大不超过5 mm。 4扩展 用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。用胶带粘住两边。将盛有约20 mL扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中(点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1 cm)。待溶剂前沿上升15―20 cm时即取出滤纸，铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。 5显色 用喷雾器均匀喷上0.1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(80℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。 6计算各种氨基酸的Rf值。 1、何谓纸层析法? 平衡溶剂的作用? 2、何谓Rf值? 影响Rf值的主要因素? 3、分配系数？ 4、讨论AA极性与Rf的关系 * * 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。 目 的 原 理 在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。 器 材 试 剂 操 作 （单向上行层析法） 思 考 题