高致病性PRRSV河北地方株的分离鉴定及部分Nsp2基因变异分析.pdfVIP

动物医学进展．2010，31(S)：90—93 in Medicine Veterinary Progress 高致病性PRRSV河北地方株的 分离鉴定及部分Nsp2基因变异分析 王金凤，张岭岭，王娇，赵泽坤，孙继国。，袁万哲 (河北农业大学动物科技学院，河北保定071001) 摘要：从唐山某猪场患高热病病料中分离到1株病毒，该病毒能在Marc-145细胞上增殖，产生细胞病 酸序列同源性分别为97．7％、97．7％、96．5％和97．1％。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；分离与鉴定；Nsp2基因；序列分析 中图分类号：$852．659．6 文献标识码：A and 猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductive 验从唐山某猪场高热死亡仔猪病料中分离到1株 respiratorysyndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综 PRRSV，通过对该毒株Nsp2基因序列分析，证明该 合征病毒(PRRSV)引起的病毒性传染病n]，以妊娠 毒株为发生变异的PRRSV。 母猪早产、流产、死胎、木乃伊胎、产弱仔等繁殖障 1材料与方法 碍，新生和断奶仔猪高死亡率及各年龄段猪(尤其仔 1．1病料和细胞 猪)的呼吸道疾病为主要特征，它能引起免疫抑制、 病料采自唐山某猪场；Mare-145细胞由中国农 继发感染及其他疾病的免疫失败等。高致病PRRS 业大学馈赠并保存。 愈益复杂，是危害我国养猪生产的第一大疫病。由 1．2工具酶及试剂 高致病PRRSV引发的疫情很多，不少地区猪场发 病严重，特别是中小型猪场。发病猪场／猪群的临 新生牛血清购自杭州四季清公司、DMEM为 床表现仍然明显，发病率和死亡率仍很高。高致病 性PRRSV毒株是目前猪蓝耳病的优势流行毒株， 但我国PRRSV毒株呈多样化。因而了解毒株的变技(北京)有限公司、pMDTMl9-T vector，Topl0菌株 异趋势对于掌握致病性和毒力具有非常重要的意 购自宝生物工程(大连)有限公司等。 ． 义。 1．3引物的设计与合成 PRRSV基因组为单股正链RNA，大小约 15kb，含有9个开放阅读框(ORF)。其中ORF2 高致病性PRRSV变异毒株的基因序列，设计1对 7编码6种结构蛋白，ORFI编码的聚合蛋白裂解 包含缺失区段的上、下游引物，由北京三博远志公司 产生12个非结构蛋白(NSPI～12)，其中对Nsp2功 合成，扩增Nsp2基因。 能研究较多。PRRSV不同分离毒株Nsp2同源性 7； 较低，且有部分缺失现象，但其与毒力的关系尚未得 到阐明。HP—PRRSV的分子特征是Nsp2基因的第 1．4病毒分离 481位和533位～561位共30个氨基酸发生缺失。 Nsp2基因长度约