人肠激酶轻链基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

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2015-09-17 发布于重庆
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人肠激酶轻链基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达.pdf

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21 1 () Vo.l 21 No. 1 2008 1 Journal of YantaiUn iversity ( N atural Science and Engineering Ed ition) Jan. 2008 : 100 8820( 2008) 0100 006 杜广营 ( , 26 005) : 研究目的: 克隆表达人肠激酶轻链编码基因, 以期应用于融合蛋白的切与纯化. 方法: 从人的全基因组中扩增出编码人肠激酶轻链的 5 个外显子基因片段, 经过酶切连接后得到正确编码的人肠激酶轻链完整基因序列; 随后, 将目的基因片段插入原核表达载体 pBV220 中, 构建成融合型表达载体 pBV- EK , 转化大肠杆菌 BL21( DE 3), 调节温度 L 至 2 诱导重组蛋白表达; 通过镍亲和层析纯化得到重组蛋白. 结果: 所表达的重组蛋白经 SDS- PAGE分析, 相对表观分子质量约为 31 kDa, 表达量占菌体总可溶蛋白量的 6% ; 通过镍亲和层析纯化得到的重组蛋白经复性后显示出具有催化切活性. 结论: 成功构建了能大量表达重组人肠激酶轻链的菌株, 为进一步进行重组人肠激酶活性的研究及其在生产和医学方面的应用研究奠定了基础. : 人肠激酶轻链; pBV 220; 基因工程; 原核表达 : Q78 : A [ 7] , , . . . , , , . , ( hum an enterok inase . , . light chain, hEK ), , L ( Enterok inase, EK, EC 3. . 21. 9) . [ 1] , 1 115 kDa 1 35 kDa . , [ 2] 1 . , , 1. 1 235 pBV 220 ( Enterokinase light chain, EK ). ; BL21( DE3). L Taq plus, T DNA , B amH IE coR [ 3- 6] I, , , TaK a . : : ( 1980), , , , , . 第 1期杜广营: 人肠激酶轻链基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 1 R a; N i- NTA Agarose: Q IAGEN ; : MJ research; M ini- Protein 3 Cell DNA M arkers, 100 bp Ladder M arker: , M ini T rans- Blot E lectrophoretic T ransfer Cel:l , -E coT1 I digest: Takara; B