霍乱弧菌的分离与鉴定(5页).docVIP

霍乱弧菌的分离与鉴定 1 标本的收集 病人粪便、呕吐物、肛拭子为必取标本。水样便或呕吐物采样量一般为1ml～3ml，成形便采取指甲大小的粪量；肛拭子可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内3cm～5cm处旋转后取出，置增菌液或运送培养基送检。 2 标本的送检 采得的标本应立即接种于培养基。不能立即接种的，应放入碱性蛋白胨水或文腊二氏保存液或插入Cary-Blair半固体保存培养基中送检。标本与保存液的比例约为1∶5。 3 分离培养 3.1增菌后分离培养：所有标本均应接种碱性蛋白胨水培养基置37℃增菌6h～8h后，从菌膜下表层取一接种环培养物，划线接种于强、弱选择性培养基各一个置37℃培养18h-24h。必要时进行二次增菌培养。 3.2直接分离培养：对急性期病人水样便标本在进行增菌培养的同时可取一接种环或用肛拭子直接接种在选择性培养基上置37℃培养18h-24h。 3.3常用强选择性培养基包括庆大霉素琼脂、TCBS琼脂和四号琼脂等。弱选择性培养基一般使用碱性营养琼脂等。 3.4不同分离培养基上生长的霍乱弧菌典型菌落特征不同，常见分离培养基的37℃18h～ 4.1菌株初筛：包括玻片凝集实验、氧化酶试验。 4.1.1 玻片凝集实验 从分离培养基上挑取疑似菌落接种于非选择性培养基进行纯培养（37℃ 18h～1群霍乱弧菌诊断用单克隆抗体或O1群多价诊断血清及O139群霍乱弧菌诊断用单克隆抗