第十章生物制品.pptVIP

3、脱毒 白喉类毒素经脱毒即成为无毒、但仍保持高度抗原性的类毒素。 影响脱毒的主要因素有⑴温度 温度越高脱毒越快，且脱毒越完善，但超过40℃对抗原性有很大破坏，一般多采用37～39℃。⑵pH pH越高脱毒越快，但碱性过强对抗原性有很大破坏，故PH在7.0±7.5较为适宜。⑶甲醛浓度 甲醛浓度越高脱毒越快，但甲醛浓度过高时脱毒后残余甲酸量过高，对抗原性有损害，并会引起注射时的强烈刺痛。⑷含氮量 毒素含氮量越高脱毒时所需甲醛量越大，按毒素氨基氮含量加适量甲醛脱毒，既能脱毒完善，又避免过多的残余甲醛量损坏抗原性。 （三）乙型肝炎疫苗的制备 乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）属嗜肝DNA病毒科（hepadnaviridae）。 HBV的发现源于表面抗原的研究。 1963年Blumberg首先在澳大利亚土著人血清中发现一种新抗原，称为澳大利亚抗原（Australia antigen）；直至1968年确定这种抗原与血清型肝炎密切相关，称为肝炎相关抗原（hepatitis associated antigen，HAA）；1970年D.S. Dane在肝炎患者血清中发现具有传染性的颗粒，即Dane颗粒（Danes particle）。从而HBV被确认。 HBV是乙型肝炎病原体，主要经输血、注射、性行为和母婴传播。起病徐缓，部分患者可转为慢性，少数还可导致肝硬化和肝癌。 乙肝病毒发病区域 全世界约有20亿人感染了该病毒，约有3.5亿人患有慢性感染。估计每年有60万人死于急性或慢性乙型肝炎。 中国6.9亿人曾感染过乙肝病毒，其中1.2亿人长期携带乙肝病毒，据专家估计，目前全国有现患慢性乙肝病人3,000万人，高发地区为西北两省(甘肃、青海),年平均发病率为213.49/10万～218.41/10万。中发地区为西部6省市(宁夏、新疆、内蒙古、重庆、四川、陕西),中部4省市(河南、山西、湖北、海南),以及东部2省市(广东、福建),年平均发病率为88.19/10万～153.30/10万。低发地区主要为东部省市(北京、天津、河北、黑龙江、辽宁、吉林、上海、江苏、安徽、山东),年平均发病率为25.41/10万～84.21/10万。 广西发病率排在全国第5位。 乙型肝炎病毒 形态与结构　　 完整的HBV颗粒亦称Dane颗粒，直径为42nm，具有双层核壳结构： 核心颗粒：直径为28nm。 颗粒内部：DNA和DNA多聚酶。 颗粒表面（内衣壳）：含有HBcAg 和HBeAg 。 外壳（包膜）：厚7nm。 脂质双层：含有HBsAg、PHSAr 和PreSAg蛋白质 HBV感染血清标志及其临床意义 HBsAg HBeAg 抗HBc 抗HBe 抗HBs 结 果 解 释 IgM IgG - - - - - + 感染过HBV或接种过乙肝疫苗,有免疫力 + - - - -/+ - 肝功正常为无症状携带者;肝功异常为正患乙肝; + - - + + - （小三阳）正患乙肝,肝炎趋向好转，有传染性 + +/- - + + - 正患肝炎,或趋于恢复，有传染性 + + +/- - - - （大三阳）正患乙肝,病毒复制,传染性强 - - - +/- + + 乙型肝炎恢复期 乙肝疫苗的制备－血源疫苗 特点: (1)血源取得困难; (2)疫苗需经安全试验,故费用大,生产周期达65周. (3)现已淘汰。 乙肝疫苗的制备－人工合成多肽疫苗 工艺过程:人工合成HBsAg的P25多肽,并在124与137位半胱氨酸残基之间引入-S-S-,使成环状多肽,用其免疫动物后,50%出现抗体应答。 特点:纯净,不会污染其他病毒,无传染性,原材料来源方便,但目前生产成本高,难以大量生产。 乙肝疫苗的制备－基因工程疫苗 工艺路线: (1)? 将HBV的DNA片段插入到质粒并引入到E.coli中,使其复制表达抗原物质。 (2)?将HBV的DNA片段插入到牛痘病毒,再由此病毒重组体感染细胞,可分泌HBsAg。 (3)用一含HbsAg的质粒转化中国仓鼠卵巢细胞(CHO),在该细胞中表达HbsAg蛋白,释放于培养液中,从培养液中提纯抗原蛋白。 曾研究过用真核和原核细胞作为表达宿主，包括哺乳动物细胞、植物细胞、酵母、细菌和病毒等。 目前大规模生产的表达系统有酿酒酵母、毕赤酵母和汉逊酵母等基因工程疫苗，其次为CHO细胞基因工程疫苗，还有HBsAg+PreS2或HBsAg+PreS1+ PreS2（CHO细胞和酵母表达系统）。 七 核酸疫苗 1