第章沉淀反应免疫电泳.pptVIP

种类：对流免疫电泳、火箭电泳、免疫电泳、免疫固定电泳等。 * * * * * * * * * * * * * * * * 临床免疫学与免疫学检验 * ㈢影响因素 1、标准曲线应每次测定同时作 2、Ig 测定假性结果（单抗测多态性抗原-抗体过剩，d变小；多抗测单克隆蛋白-抗原过剩，d变大) 3、双重沉淀环现象（抗原相同扩散率不同的两个组分所致:α重链病血清中α重链与正常IgA） * 临床免疫学与免疫学检验 * 二、双相（免疫）扩散  是指抗原和抗体在同一凝胶内都扩散，彼此相遇，相对应，比例合适处形成一白色沉淀线。观察沉淀线的位置、形状以及对比关系，对抗原、抗体定性或定量分析。 ㈠试管法 * 临床免疫学与免疫学检验 * ㈡平板法 ★结果分析（根据沉淀线的有无、形态、位置及数目等作如下分析） 1、抗原或抗体存在与否以及估计其相对含量 沉淀线靠近含量低的一方 2、分析抗原或抗体的相对分子量 沉淀线弯向分子量大的一方 3、抗原性质的分析 * 临床免疫学与免疫学检验 * 图双扩散各种孔型 * 临床免疫学与免疫学检验 * 估计其相对含量、相对分子量 * 临床免疫学与免疫学检验 * 图三种双扩散基本图形 * 临床免疫学与免疫学检验 * 4、滴定抗体的效价 5、抗原或抗体纯度分析 * 临床免疫学与免疫学检验 * 掌握： 沉淀反应、高剂量钩状效应、免疫浊度测定、 Fahey曲线、 Mancini曲线的概念；单向扩散试验、双向扩散试验原理、方法、结果判断及影响因素；免疫浊度测定的基本原理。 熟悉： 液体内沉淀试验 ( 絮状沉淀试验 ) ； 免疫比浊法测定中的影响因素。 * 临床免疫学与免疫学检验 * 思考题 1、凝胶内沉淀反应（琼脂扩散反应）的基本原则。 2、试述单相琼脂扩散实验定量检测的原理。 3、如何分析各种双相琼脂扩散实验的结果？ 4、试述免疫比浊法测定的影响因素。 * 临床免疫学与免疫学检验 * 第四节　免疫电泳技术 沉淀反应加电泳分析 抗原抗体反应的高度特异性与电泳技术的高分辨率、快速、微量。 优点： 1.加快反应的速度。 2.提高了灵敏度。 　　 3.增加了分辨率。 * 临床免疫学与免疫学检验 * * 临床免疫学与免疫学检验 * 原理：双相扩散+电泳 比双扩灵敏度提高8～16倍 技术要点：制备1.2%巴比妥琼脂凝胶板，在其上成对打孔，孔径3mm，孔距6 mm，于阴极侧孔内加待测血清，阳性侧孔加抗血清，电泳条件3～4mA/cm 玻片宽度 ，30min～1h。 一、对流免疫电泳 * 临床免疫学与免疫学检验 * 通电 － 蛋白质抗原常带较强的负电荷，在电场中向正极移动 抗体球蛋白 带负电荷较少，籍电渗作用向负极泳动 ＋ 对流免疫电泳 * 临床免疫学与免疫学检验 * 结果分析： 无沉淀线出现则表明无相应的抗原。 沉淀线位于抗原抗体孔中间，说明两者比例较适合。 沉淀线偏向抗原孔一方，表示抗体浓度＞抗原，反之，则是抗体浓度＜抗原浓度。 对流免疫电泳 IgG的4个亚类：IgG3、IgG4泳向阳极，IgG1、IgG2泳向阴极 * 临床免疫学与免疫学检验 * 电泳时凝胶中抗体不移动，样品孔中的抗原向正极泳动，随着抗原量的逐渐减少，抗原泳动的基底区越来越窄，抗原抗体分子复合物形成的沉淀线逐渐变窄，形成一个形状如火箭的不溶性复合物沉淀峰，抗体浓度固定时，峰的高度与抗原量呈正相关。 单相免疫扩散＋电泳,定量检测 二、火箭免疫电泳 * 临床免疫学与免疫学检验 * 技术要点:1.2%巴比妥琼脂糖约55℃，加入适量抗血清，混匀后制板，打孔，孔内加待测样品，样品孔放负极侧， 6h后观察琼脂板上沉淀峰，绘制标准曲线，求出待测样品浓度。 * 临床免疫学与免疫学检验 * 影响因素 1.琼脂（无电渗或电渗很小的）影响火箭形状不规则。 2.电泳终点时间的确定。3.标本数量多时应先通电后加样,防止宽底峰形. 4.IgG定量时，可用甲醛与IgG上的氨基结合（甲酰化），抵消了电渗作用。 * 临床免疫学与免疫学检验 *