第章生物素亲合素放大技术.pptVIP

㈡链霉亲合素的标记 1、HRP-SA 过碘酸钠 2、 SA-生物素化HRP SABC 3、AP-SA 戊二醛二步法 三、稳定性 结合不可逆性、稳定，提高 精确度 四、适用性 与标记技术结合用于检测； 制成亲和介质用于分离提纯 五、其他 制备通用性试剂（Ab2-B）； 高度稀释、用量少、低成 本；虽然反应层次多，但反 应时间不长 大纲要求 掌握：生物素的理化性质与标记，生物素-亲和素系统基本类型及原理 熟悉：亲合素、链霉亲合素的理化性质与标记。生物素、亲和素系统的特点。生物素、亲合素系统的应用。 了解：其他 * * 临床免疫学与检验 小 结 生物素—亲合素（链霉亲合素）系统具有的多级放大独特效应，可极大地提高分析测定的灵敏度；二者之间的高亲和、高特异结合以及既可偶联生物大分子，又可连接标记材料的特性，使该系统在标记免疫分析技术领域中的应用具有很强的稳定性和适用性。该系统有二种基本类型：以游离亲合素为中间物，分别连接包含生物素化大分子的待检反应体系和标记生物素的BAB法或ABC技术；另一类是直接用标记亲合素连接生物素化大分子反应体系进行检测的BA法或LAB。 * * 临床免疫学与检验 在生物素—亲合素（链霉亲合素）放大系统应用中，无论采用酶、荧光素或发光物作为检测示踪剂，均是待测抗原与生物素化抗体反应形成复合物后，再利用生物素与亲合素间的多价放大结合特性，或直接与标有示踪剂的生物素结合（BA、LAB法），或依次与亲合素（链霉亲合素）、生物素示踪标记物反应连接成聚合物（BAB、ABC法），最终使待测反应信号被放大，提高检测方法的灵敏度。 * * 临床免疫学与检验 思考题 生物素的分子结构特点是什么？ 生物素通过什么结构、形式与生物大分子相连结？ 亲合素或链霉亲合素的分子结构、理化性质有何特点？ 为什么亲合素、链霉亲合素具有“桥联”作用？ 亲合素、链霉亲合素可以被哪些示踪剂标记？ 为什么生物素－亲合素系统具有放大作用？ 生物素与亲合素或链霉亲合素的结合是否与抗原抗体结合相同？ 生物素－亲合素系统放大的是反应过程还是单一检测信号的能量？ 生物素、亲合素或链霉亲合素如何与标记免疫技术联接？ 如何将生物素－链霉亲合素放大系统用于所有双位点ELISA? * * 临床免疫学与检验 临床免疫学与检验 第十一章 生物素-亲合素放大技术 * * 临床免疫学与检验 第一节 生物素的理化性质与标记第二节 亲合素、链霉亲合素的理化性质 与标记第三节 生物素-亲合素系统的特点第四节 生物素-亲合素系统（BAS）的应用一、BAS基本类型及原理二、BAS在酶免疫测定中的应用三、BAS在荧光免疫技术中的应用四、BAS在放射免疫测定中的应用五、BAS在分子生物学中的应用 * * 临床免疫学与检验 生物素（biotin）、亲合素（avidin）是一对具有高度亲和力的物质，结合迅速、专一、稳定并具有多级放大效应。 生物素-亲合素系统（biotin-avidin system,BAS）：生物素和亲合素结合多级放大作用；偶联抗原或抗体，被荧光素、酶、放射性核素等标记。 BAS与标记技术结合广泛应用。 * * 临床免疫学与检验 维生素H 动、植物组织中广泛 分布,卵黄和肝含量高 MW 244.31kD. I环为咪唑酮环，可结合 亲合素 Ⅱ环为噻吩环，C2上戊酸 侧链的未端羧基是结合生 物大分子的唯一结构 I 咪唑酮环 Ⅱ 噻吩环 羧基 第一节 生物素理化性质与标记 * * 临床免疫学与检验 一、活化生物素 生物素侧链的末端羧基经化学修饰后制成带各种活性基团的衍生物－活化生物素。 * * 临床免疫学与检验 活化生物素 活化生物素易 与抗原、抗体、 酶及核酸分子 中相应基团偶 联形成生物素 化标记物 标记蛋白质氨基的活化生物素 标记蛋白质醛基的活化生物素 标记蛋白质巯基的活化生物素 标记核酸的活化生物素 * * 临床免疫学与检验 * * 临床免疫学与检验 标记蛋白质氨基的活化生物素 BNHS分子可与蛋白质赖氨酸的氨基形成肽键 BNHS适用标记抗体和中性或偏碱性的蛋白质 生物素 N-羟基丁二酰胺 碳二亚胺的 作用下缩合 生物素N-羟 基丁二酰 亚胺酯（ BNHS ） * * 临床免疫学与检验 生物素分子小，为减小空间位阻效应，制备 长臂活化生物素（BCNHS）： 生物素和N-羟基丁二酰亚胺之间添 加了两个6-氨基已糖分子基团，形 成连结臂，增加生物素与大分子基 团的距离 * * 临床