第章发光免疫技术.pptVIP

前提：发光反应提供化学能（如氧化还原反应），激发态分子回复基态释放光子。 辣根过氧化物酶标记化学发光免疫分析示意图 以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原)，与待测标本和固相载体发生免疫反应，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，加入AMPPD发光剂，碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。 ㈡ 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析 碱性磷酸酶标记化学发光免疫分析示意图 电化学发光免疫分析（electrochemiluminescence immunoassay， ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记 抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体， 在电场中因电子转移而发生特异性化学发光 反应，它包括电化学和化学发光两个过程。 三、电化学发光免疫分析 在电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒（即固相载体）包被抗体(抗原)，用三联吡啶钌标记抗体(抗原)，在反应体系内待测标本与相应的抗体(抗原)发生免疫反应后，形成磁性微粒包被抗体-待测抗原-三联吡啶钌标记抗体复合物，这时将上述复合物吸入流动室，同时引入TPA缓冲液。 当磁性微粒流经电极表面时，被安装在电极下面的电磁铁吸引住，而未结合的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压，启动电化学发光反应，使三联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光，光的强度与待测抗原的浓度成正比。 电化学发光免疫分析示意图 电化学发光免疫测定示意图 标记磁颗粒在电场中发光工作示意图 各种激素、肿瘤标志物 、药物浓度、微量活性物质 1.甲状腺激素 2．生殖激素 3．垂体激素和皮质激素 4．贫血因子 5．肿瘤标志物 6．感染性疾病 7．糖尿病 胰岛素、血清C-肽、血浆胰高糖素等。 8．心脏标志物 9．病毒标记物 10．过敏性疾病 11．治疗药物监测 四、临床应用 大纲要求 掌握：发光免疫分析、化学发光剂、化学发光免疫分析的概念，化学发光剂的种类，化学发光免疫分析的类型及原理（直接化学发光、电化学发光免疫分析的原理）。 熟悉：概述。　 了解：发光剂的标记方法，影响发光剂标记的因素，化学发光免疫分析的临床应用。 发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态跃迁到激发态，然后再返回到基态，并释放光子的过程。化学发光是吸收了化学反应过程中所产生的化学能使分子激发而发光。化学发光免疫分析是将化学发光与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的标记免疫分析技术，分为直接化学发光免疫分析，化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析。 小 结 1．什么是发光免疫分析？什么是化学发光免疫分析？ 2．化学发光与荧光的区别？化学发光反应的条件？ 3．什么叫化学发光剂？化学发光剂必须具备那些条件？ 4．吖啶酯化学发光的原理和特点是什么？ 5．酶促反应的发光剂有哪些？其发光原理和特点是？ 6．三联吡啶钌发光的原理和特点是什么？ 7．三丙胺在电化学发光中起什么作用？ 8. 发光剂的标记有那些方法？影响因素有那些？ 9．什么是直接化学发光免疫分析？其特点是什么？ 10．什么是化学发光酶免疫分析？其特点是什么？ 思考题 * * * 第十章 化学发光免疫分析技术 第一节 概述 　 一、化学发光 　 二、化学发光效率 第二节 化学发光剂和标记技术 　 一、化学发光剂 　 二、发光剂的标记技术 第三节 化学发光免疫分析的类型 一、直接化学发光免疫分析 二、化学发光酶免疫分析 三、电化学发光免疫分析 四、临床应用 小结 发光免疫分析:是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。 发光分析—高灵敏性（尤其超弱光检测技术） 抗原抗体反应—高特异性 第一节 概 述 发光:是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态（较低能级）跃迁到激发态（较高能级），然后再返回到基态，并释放光子的过程。 根据形成激发态分子的能量来源不同可分为:光照发光、生物发光、化学发光等。 光照发光（photoluminescence）是指发光剂（荧光素）经短波长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁到激发态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可见光（荧光）。 生物发光（bioluminescence）是指发生在生物体内的发光现象（实为化学发光），如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP能，生成氧化型荧光素（激发态），它在回复基态时多余的能量以光子的形式释放出来。 化学发光（chemiluminesce