金域检验维生素D检测流程说明书.pdf

D D 金域检验维生素DD 检测项目说明书 第一部分、25羟基维生素D项目基本信息 一、标本要求 1、标本类型：静脉血，血清，需尽快分离 2、标本量：1ml，最少0.5ml 二、检测流程 1、吸取200ul 血清+蛋白沉淀试剂+内标； 2、震荡后加入萃取溶剂，震荡萃取； 3、吸取上清液，氮气吹干； 4、定容100ul 上机测试。 三、检测方法 1、检测方法介绍 1) 高效液相色谱—串联质谱法：液相色谱质谱联用将色谱的分离能力与质谱的定性功能结 合起来，实现了对复杂混合物更准确的定量和定性分析，简化了样品的前处理过程，使 样品分析更简便。 2、方法学优势 1) 采用液液萃取的前处理方法，最大程度的从血清中提取出待测物； 2) 通过液相色谱法将待测物与杂质完全分离，进一步对待测物提纯、分离； 3) 最后采用串联质谱法进行定性定量，有效保证结果的准确、可靠； 4) 由于灵敏度高、特异性强、高通量，已成为医院规范化测量25(OH)D 的“金标准”方法。 第二部分、实验室质量管理介绍 一、检测仪器 我司采用国际一流的美国AB 公司的液相色谱串联质谱仪（API4000），进行血清25 羟基 维生素D 的检测，从而准确、高效的检出体内维生素D 营养水平。 实验员审批结果 API4000 仪器参数如下： 1、液相色谱部分 四元梯度泵: 流量范围：0.001-10.0ml/min, 0.001 ml/min递增 流量精度：≤0.15%RSD 压力范围：0-400bar 梯度洗脱：0-100%，0.1%递增 梯度混合精度：±0.2% 带在线四通道脱气装置 自动进样器: 可放置≥100个2 ml样品瓶 进样量：0.1-100μl 进样精度：0.5%RSD 二极管阵列检测器(1024个tube) 2、质谱部分 包括ESI和APCI离子源(非复合源) 电喷雾离子源（ESI）：流量1-2000μl/min(无需分流) 大气压化学电离源（APCI）：流量50-3000μl/min(无需分流) 离子源接口适用于100%有机相到100%水相 三级四极杆串联型质量分析器 质量范围 m/z：5-3000 分辨率：≤0.5amu 质量数稳定性：≤0.1 amu/12h 定量范围：4*10 二、检测试剂 1、 为了最大限度的保障该项目的检测质量，我们采用了美国SIGMA 公司的标准品和内标 品；采用德国RECIPE 公司的质控品。 2、 为了保障方法的准确度，我们采用了美国标准化委员会给出的用于核查25 羟基维生素 D 检测方法准确度的标准物质SRM972。 三、 串联质谱检测质控 1、国际标准化质控：参加美国CDC 举办的串联质谱质控，每年2-3 次。 2010 年美国CDC 证书 2011 年美国CDC 证书 2、室内及室间质评：每年由美国CDC 统一发放室内质控品，由实验室测定上报质控结果， 并进行全球范围内统计分析。 3、通过美国NIST 校准品检测和BIO-RAD 质控品检测，确保结果的准确性。 4、每日每批次进行至少两个浓度质控测定，保证质量。 第四部分、25(OH) D检测报告 1 1 11、我中心报告参考值 1) 儿童参考值范围： 5ng/mL 维生素D 严重缺乏 5-15ng/mL 维生素D 缺乏 16-20ng/mL 维生素D 不足 20-100ng/mL 维生素D 正常 100ng/mL 维生素D 过量 2) 成人参考范围： 20ng/mL 维生素D 缺乏 20-30ng/mL 维生素D 不足 30-100ng/mL 维生素D 正常 100ng/mL 维生素D 过量 ——中华医学会儿科学分会儿童保健组、《中华儿科杂志》编辑委员会：儿童微量营养 素缺乏