血清蛋白双向凝胶电泳-质谱分析诊断早期肺腺癌的临床研究.pdfVIP

医刊2011年2月第 38卷第4—~ ChineseJou—rnalofPracticalMedicineFeb．2011,Vo1．38,No．4 · 21 · 血清蛋 白双 向凝胶 电泳 一质谱分析 诊断早期肺腺癌 的临床研究 刘德义 付月云 彭燕 张海生 黄河 摘【要】 目的 分析肺腺癌患者与正常人血清双向凝胶电泳的差异蛋白质，从而寻找肺腺癌早期特异性的诊 断指标。方法 用固相 IPG梯度双向凝胶 电泳分离肺腺癌患者及正常人血清总蛋白，用PDQuest凝胶图像软件分 析，以识别差异蛋白质点。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪 (MALDI—TOF—Ms)分析获得肽质量指纹 图，然后利用Mascot查询软件搜寻数据库鉴定蛋白质。结果 ①获得 了重复性较好的双向电泳银染图谱。②经 PDQuest7．1软件匹配分析 ，共筛选 出22个差异的蛋 白点，对 7个差异蛋 白点进行胶 内原位酶解 一质谱指纹 图分 析，获得了7张肽质量指纹图谱 ，查询数据库鉴定出1个蛋白质一血清淀粉样蛋白A(SAA)。结论 ① 固相pH梯 度双向凝胶电泳分离血清总蛋白获得 了重复性较好的双向电泳凝胶 图谱。②肺腺癌患者血清和正常人血清的蛋 白质组表达存在明显差异，这些差异蛋 白点为进一步建立人肺癌的2一DE数据库奠定了基础。⑧SAA蛋 白很可能 是肺癌的一个潜在标志物。 【关键词】 肺肿瘤；腺癌；血清；双向凝胶电泳；基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪；蛋白质组 Twodimensionalgelelectrophoresis——massspectrometryofserum proteinindiagnosisoflungad- enocarcinoma UUDe—yt，FUYue—yun．PENGYan，ZHANGHai—sheng，HUANGHe．Departmentof RespiratoryMedicine，theCentralHospitalofXinxiang，Xinxiang453000，China A【bstract】 Objective Toanalyzetheproteomiccomponentsoftheserumfromthepatientswith lungadenocarcinomaandhealthydonors，insearchofthespecifictumormarkersoflungadenocarcinoma fordiagnose．Methods Theserum totalproteinofhumanlungadenoearcinomaserum andhealthydo— norsserum wereseparatedbyimmobilizedpH gradientbasedontwo——dimensionalpolyacrylamidegele-· lectrophoresis(2一DE)．ThedifferentiallyexpressedproteinswereanalyzedusingPDQuestanalysissoft— ware，thenidentifiedusingMALDI—TOF—MSandMascotdatabasesearching．Results ①Goodrepro— ducible2一DEimageweresuccessfullyobtained．②AnalyzedbyPDQuest2一DEsoftware，twenty—two proteinswerefounddifferentiallyexpressedinserum from lungadenocarcinomapatientsandhealthydo— nors．Sevenproteinspotsofinterestwereincisedfrom gelanddigested in—gelbytrypsin，sevenPMF mapswereobtainedbyMALDI—TOF—MS．ThetypicalpeptidemassesweresearchedintheNCBInrda— tabasebyMascotsoftware，oneproteinwasidentifiedsuccesfully．ItwasserumamyloidA(SAA)．Con- clusions ①GoodreproducibilitycouldbeobtainedbyapplyingimmobilizedpH gradienttwo—dimen— sionalpolyaerylamidegelelectrophoresisto