质粒DNA的提取和鉴定1.pptVIP

质粒DNA的提取及鉴定 实验目的 掌握质粒DNA制备的原理和方法 了解质粒琼脂糖凝胶电泳分离 实验原理 细菌悬浮液暴露于阴离子去污剂（SDS） 试 剂 溶液Ⅰ：50 mmol/L葡萄糖、10mmol/L EDTA、25mmol Tris-HCl pH8.0 溶液II（新鲜配制）: 1mol/L NaOH 200?l、 10% SDS 100 ? l、H2O 700 ? l 溶液 III : 29.4g KAc、11.5ml冰醋酸、加水至100ml 实验流程 细菌于LB培养基中培养过夜，分装（1ml/支），4000rpm离心2min，弃上清。 沉淀重悬于100?l溶液Ⅰ中, 震荡混匀。 加入200 ? l新鲜配制的溶液Ⅱ，颠倒混匀。 加入150 ? l溶液Ⅲ，颠倒混匀，冰浴5min，12000rpm离心10min。 上清移至另一干净EP管中，加入等体积饱和酚（约450 ? l），颠倒混匀，12000rpm 离心10min。 实验流程 上清移至另一干净EP管中，加入等体积酚/氯仿，颠倒混匀，12000rpm离心10min。 上清移至另一干净EP管中，加入2倍体积冷无水乙醇混匀，静置5min，12000rpm离心10min。 弃上清，用0.5ml 70% 乙醇洗涤DNA，弃上清，倒置干燥。 加入1