质粒DNA的提酶切与PCR鉴定秋.pptVIP

质粒DNA的提取、定量、酶切与PCR鉴定 /sfzx/ 生物工程中如何获得目的基因？ 酶切染色体 PCR扩增 逆转录PCR 基因文库 人工合成 实验目的 掌握PCR基因扩增的原理和操作方法 掌握碱裂解法提取质粒的方法 了解紫外吸收法检测DNA浓度与纯度的原理、方法 学习水平式琼脂糖凝胶电泳操作 第一部分 聚合酶链式反应 Polymerase Chain Reaction 第二部分 质粒DNA提取与定量 Extraction and Quantitation of Plasmid DNA 独立于细菌染色体外，能独立自主复制的闭合环状DNA分子； 存在于细菌，放线菌，真菌以及一些动植物细胞中，在细菌细胞中最多． 碱裂解法 煮沸裂解 羟基磷灰石柱层析法 质粒DNA释放法 酸酚法等 分离质粒DNA的方法都包括3个基本步骤： 培养细菌使质粒扩增； 收集和裂解细菌； 分离质粒DNA 2、离心层析柱 溶液 P1（S1) 溶液 P2 (S2） 溶液 P3（S3） 去蛋白液 PE（W1) 漂洗液 WB(W2） 洗脱液 EB（Eluent) 50mmol/L 葡萄糖 25mmol/L Tris·Cl(pH8.0) 10 mmol/L EDTA (pH8.0) Rnase 酶 作用：葡萄糖悬浮细胞，EDTA鳌合金属离子使DNase失活 Rnase 酶降解RNA 注意：菌液一