高效液相色谱法紫外检测人尿中美托洛尔和α-羟基美托洛尔.pdfVIP

高效液相色谱法紫外检测人尿中美托洛尔和 -羟基美托洛尔* 黄松林 谢红光 万 捷 周宏灏 湖（南医科大学药理学教研室 长沙 410078） 提要 用高效液相色谱法紫外检测人尿中美托洛尔(M)和 羟腔基美托洛尔(HM)浓度，采用SpherisorbODS 125mm 4mmi.d.(5m)色谱柱，甲醇 水 冰乙酸 三乙胺(70:30:0.12:0.03)为流动相，紫外检测波 长为215nm。M和HM的平均回收率分别为98.5％和99.8％日内和日间变异系数均小于4.5％。方法快速、 简便、灵敏，可用于药物氧化分型研究。 关键词 高效液相色谱法，美托洛尔，-羟基美托洛尔，人尿，药物氧化分型 1 前言 3 结果与讨论 在不同种族人群中，美托洛尔(M)氧化生成 - 羟基美托洛尔(HM)具有异喹胍型遗传多态性[1]。因 3.1 色谱分离 图1为在本实验条件下测得人空 此，检测人尿中M和HM浓度可作为人群异喹胍药 白尿样和M与HM标准尿样的色谱图。可见M与 物氧化遗传分型的方法之一[1,2]。国内外报道过几种 HM分离 良好，尿中杂质对M和HM 的测定无干 同时检测M和HM 的HPLC，但有些方法制备样品 扰，分析一个样品只需5min。 费时，需要荧光检测[3,4]；虽也有用紫外检测[5]，但待 测物保留时间长 约（20min）、灵敏度低、线性范围 窄。为了快速、简便和准确地检测人尿中M和HM 浓度．本室在原建方法[6]中改用二氯甲烷提取和紫 外检测法进行定量分析，获得了满意的结果。 2 实验部分 2.1 仪器 惠普HPSeries1050高效液相色谱仪， 配匹手动进样器、紫外检测器和HP3395积分仪。 2.2 试剂与药品 甲醇 浙（江黄岩化工实验厂）为 色谱纯。冰乙酸、三乙胺、二氯甲烷、氢氧化钠均为市 售国产分析纯试剂。实验用水为去离子双蒸水。美托 洛尔酒石酸盐和普萘洛尔盐酸盐均购自美国Sigma 公司，-羟基美托洛尔由瑞典Astra公司提供，美托 3.2 线性范围与检测下限 用空白尿液配制标准 洛尔片剂为华瑞制药有限公司产品。 M和HM混合物尿样，按2.4项操作，得尿样中M 2.3 色谱亲件 惠普SpherisorbODS柱(125mm 与IS的峰高比YM(V)、HM与IS的峰高比YHM ×4mm,5m)。流动相为甲醇 :水 :冰乙酸 :三乙 (VYM)与＝浓0.度476XXMM，＋XH0M.0(m05g4/,L)rM的＝线0性.9回99归9方(n程＝为6):: 胺=70:30:0.12:0.03(V/V)，流速1mL/min,紫 外检测波长215nm，进样体积20L。 YHM＝0.3943XHM－0.0692,rHM＝0.9973 n（＝7)。 线性范围分别为0.1～?15mg/L(M),0.05～15 2.4样品预处理 取1mL待测血浆，加40mg/L普 mg/L(HM)。最小检测量分别为0.05mg/L(M), 蔡洛尔 （内标，IS）50L，Imo1/LNaOH液0.1mL，混 0.Olmg/L(HM 。 匀后加 5mL二氯 甲烷，振荡提取 3min，以3500 r/min速率离心 l0min，取下层有机相4mL，37 水 3.3 回收率及梢密度 配制浓度分别为1.0,10.0 浴挥干。用100L流动相溶解，取20L进样。 和15.Omg/L的含M与HM标准尿样各5份，按上 *本课题由NSFCCMB92-568基金资助 本文收稿日期:1995年5月12日，修回日期:1995年8月12日 法平行操作分析，结果见表 1。