高中生物《细胞分化、衰老和凋亡》素材5 苏教版必修1.docVIP

第2节 细胞的分化、衰老和凋亡 细胞凋亡 分子生物学原理 　　也称为“固缩坏死”、“程序性细胞死亡”或“细胞自杀”，是由基因介导的一系列变化，细胞依靠它来主动地引起它自身的破坏。正常起消除老化细胞或未参与免疫反应的淋巴细胞的凋亡过程，如发生病理性干扰，可对肿瘤生成起作用。凋亡最初由特征性的形态变化来确定，包括：DNA的程序性降解、染色质浓缩、细胞缩小和碎裂。它可以是生理性的，或由化疗药物及放射诱发（来自希腊文，apoptosis,描写深秋枯叶从涂写上掉落的现象）。 　　是一种细胞受环境刺激后，在基因调控之下所产生的自然死亡现象，在这一机制下，失去作用或已经受损的细胞会自我毁灭。细胞发生变异的癌细胞就是因为关闭了细胞内线粒体的这一调控功能，所以才躲过这一调控机制，不会自我毁灭。 　　细胞凋亡检测 　　1、 　　早期检测: 　　1) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测 　　2)细胞内氧化还原状态改变的检测 　　3)细胞色素C的定位检测 　　4) 线粒体膜电位变化的检测 　　2、 　　晚期检测： 　　细胞凋亡晚期中，核酸内切酶在核小体之间剪切核DNA，产生大量长度在180-200 bp 的DNA片段。 　　对于晚期检测通常有以下方法： 　　1) TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记) 　　2) LM-PCR Ladder (连接介导的PCR检测) 　　3) Telemerase Detection (端粒酶检测) 　　3、生化检测： 　　1）典型的生化特征：DNA 片段化 　　2）检测方法主要有：琼脂糖凝胶电泳、原位末端标记（TUNEL）等 　　3）TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记） 　　4）通过DNA末端转移酶将带标记的 dNTP （多为dUTP）间接或直接接到DNA片段的3’-OH端，再通过酶联显色或荧光检测定量分析结果。可做细胞悬液、福尔马林固定或石蜡处理的组织、细胞培养物等多种样本的检测。 　　4、LM-PCR Ladder (连接介导的PCR检测) 　　当凋亡细胞比例较小以及检测样品量很少（如活体组织切片）时，直接琼脂糖电泳可能观察不到核DNA的变化。通过LM-PCR,连上特异性接头，专一性地扩增梯度片段，从而灵敏地检测凋亡时产生梯度片段。此外，LM-PCR 检测是半定量的，因此相同凋亡程度的不同样品可进行比较。如果细胞量很少，还可在分离提纯DNA后，用32P-ATP和脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）使DNA标记，然后进行电泳和放射自显影，观察凋亡细胞中DNA ladder的形成。 　　上述两种方法都针对细胞凋亡晚期核DNA断裂这一特征，但细胞受到其它损伤（如机械损伤，紫外线等）也会产生这一现象，因此它对细胞凋亡的检测会受到其它原因的干扰。需结合其它的方法来检测细胞凋亡。花开花谢，似水流年…… 　　其它方法： 　　1）Telemerase Detection (端粒酶检测) 　　端粒酶是由RNA和蛋白组成，它可以自身RNA为模板逆转录合成端粒区重复序列，使细胞获得“永生化”。正常体细胞是没有端粒酶活性的，每分裂一次，染色体的端粒会缩短，这可能作为有丝分裂的一种时钟，表明细胞年龄、复制衰老或细胞凋亡的信号。研究发现，90%以上的癌细胞或凋亡细胞都具有端粒酶的活性。 　　2）mRNA水平的检测 　　研究者们发现了很多在细胞凋亡时表达异常的基因，检测这些特异基因的表达水平也成为检测细胞凋亡的一种常用方法。据报道，Fas 蛋白结合受体后能诱导癌细胞中的细胞毒性T细胞（cytotoxic T cells）等靶细胞。Bcl-2 和bcl-X (长的) 作为抗凋亡（bcl-2 和bcl-X）的调节物，它们的表达水平比例决定了细胞是凋亡还是存活。用荧光定量PCR技术来检测基因表达水平无疑比之前者更快更准确。通过检测fas, bax-alpha 和 bcl-X (长的) 基因的 mRNA表达水平来进行细胞凋亡的检测。 　　5、细胞内氧化还原状态改变的检测： 　　正常状态下,谷光苷肽(GSH)作为细胞的一种重要的氧化还原缓冲剂。细胞内有毒的氧化物通过被GSH还原而定期去除，氧化型的GSH又可被GSH还原酶迅速还原。这一反应在线粒体中尤为重要，许多呼吸作用中副产物的氧化损伤将由此被去除。当细胞内GSH的排除非常活跃时，细胞液就由还原环境转为氧化环境，这可能导致了凋亡早期细胞线粒体膜电位的降低，从而使细胞色素C（三羧酸循环中的重要组分）从线粒体内转移到细胞液中，启动凋亡效应器caspase的级联反应。花开花谢，似水流年…… 　　6、细胞色素C的定位检测 　　细胞色素C作为一种信号物质，在细胞凋亡中发挥着重要的作用。正常情况下，它存在于线粒体内膜和外膜之间的腔中，凋亡信号刺激使其从