HPV16型E5基因重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-E5的构建与鉴定.pdf

生基鳖压堡鳇盘查垫!Q生!Q旦筮!!鲞箜!塑鱼虫』￡!也丛!生!坠：Q!塑熊!!Q!Q：!尘：!!：盟Q：! ·507· 基础研究· HPV 16型E5基因重组逆转录病毒 表达载体pLEGFP·E5的构建与鉴定 杨文宇1，江彤2，陈传俊3 (1．安徽医科大学附属省立医院、安徽省立医院口腔科，合肥230001；2．安徽农业大学植物保护学院；3．安徽医科大学第三 附属医院口腔科) 【摘要] 目的 构建HPV16型E5基因重组逆转录病毒表达载体。方法根据HPVl6型E5基因已知 序列，用PCR方法扩增E5片段，利用逆转录病毒载体pLEGFP-N1构建重组质粒pLEGFP-E5。酶切电泳验证 转染NIH3T3细胞。结果PCR结果显示扩增片断大小约252bp，与预期相同。重组质粒酶切后显示其大小 约7300bp。pLEGFP．E5成功转染检测细胞。结论重组逆转录病毒表达载体pLEGFP．E5基因构建成功，能 有效感染靶细胞。 [关键词]乳头状瘤病毒感染；染色质组装和分解；转染；逆转录聚合酶链反应 [中图分类号]R373．5[文献标识码]A [文章编号]1672-6790(2010)05-0507-03 vector Wen·· ConstructionandidentificationofHPV16recombinantretroviral YANG expressionpLEGFP-E5 AnhuiProvincial Medi— yul，JIANG乃昭2，CHENChuan-jun3(1．DepartmentofStomatolngy，A嘶liatedHospital，Anhui cal 230001，China) University，Hefei author：CHEN 18@sina．corn．cn Corresponding Chuan-jun，E-mail：ccjB3 HPv E5 retroviral vector．Methods Toconstruct16 recombinant [Abstract]Objectivetypegene expression Basedonthe of E5 E5 were PCR．Retroviral sequenceHPVl6·typegene，theHPVl6·typefragmentsamplifiedby usedto recombinant confirmation vector Was construct pLEGFP-N1 plasmidpLEGFP—E5．Afterbyelectrophoresis，the 17 cell medi- recombinant w砸transfectedintoPA3cell kit．Theculture plasmid usingLipofectamin2000 pLEGFP-E5 forNIH3T3celltransfection．ResultsPCRresults thatthesizeofanl· am retrovirusWascollected showed containing Was recombinant thesizeofabout aft