您不可不知地·流式抗体选购常识【完整版】.pdfVIP

福麦斯生物技术有限公司 地址：南京市秦淮区中华路 363 号 606 室 电话：025 网址： 传真：025 微博 ：/fcmacs 您不可不知的·流式抗体选购常识 随着流式细胞术应用领域的日益广泛，流式抗体及荧光标记产品的种类、数量也在不断增多，加 上多色分析实验方案需求的增长，逐渐产生了抗体难选择、荧光难搭配等问题，给实验顺利开展带来了 诸多困扰。流式抗体如何选择，也成为了流式技术是否能被成功应用的关键因素之一。如何从众多的流 式厂商中筛选出最适合您的抗体，请看流式抗体专家——福麦斯生物为您精心整理总结的《您不可不知 的·流式抗体选购常识》 流式抗体如何选择，主要可以从以下六个方面进行考虑： ◆满足抗体选择的基本条件 流式抗体本身也是抗体，所以首先要满足抗体选择的最基本条件： ① 目标蛋白特异性 ：确定目的细胞的特异性表面标记或者胞内标记，知道您要检测什么 ； ② 严格按照样本种属来源进行选择，流式抗体基本无法进行种属交叉反应； ③ 可用于流式实验 ，说明书中明确标注经FC 实验测试，最好有实验数据图和用量说明 ； ④ 抗体克隆号一般不需要关注，有特殊需要的情况下可以参考文献上提到的克隆；同一抗体多个克隆 号的情况下，可以选择荧光标记种类最多的那个克隆。 ◆确定流式细胞仪的参数配置 在设计流式方案前，根据可能需要同时检测指标的多少，先确定需要在哪台流式细胞仪上机检测 ， 对该仪器的参数配置，要了解以下几个方面信息： ① 有几个激发光？常见的流式细胞仪有 488nm 和 635nm 两个激光器，但有些机器在购买时因某些 原因 ，只装了一个激光器，需要注意，所以型号相同的机器也未必激光配置相同； ② 有几个滤光片？也就是有几个检测通道，这决定了你最多可以同时检测几个指标 ； ③ 了解清楚仪器的具体型号，有助于再次确定检测通道。因为同一个荧光在不同的流式细胞仪上检测， 有时候检测通道也是不一样的。 ◆荧光抗体的选择建议 流式检测的抗体必须要求都有荧光标记，在选择过程中可参考以下几方面建议 ： 专于细胞免疫方向 精于流式磁珠分选 福麦斯生物技术有限公司 地址：南京市秦淮区中华路 363 号 606 室 电话：025 网址： 传真：025 微博 ：/fcmacs ① 尽量选择直接标记有荧光的抗体，间接标记二抗会增加实验步骤，清洗多次造成细胞浪费，也会影 响实验的准确性； ② 荧光本身有强弱之分，可视抗原表达强弱及分群情况选择合适的荧光。如抗原表达弱或分群不明显 的建议选择强荧光 PE ；反之，抗原表达强或分群明显的建议选择最常用的弱荧光 FITC 即可 （常用 荧光强弱排序为 ：PEAPCPE-cy5Percp-cy5.5FITC ）； ③ 可以尝试选择新型荧光 Alexa Fluor、eFluor 等。因为这些荧光非常明亮，对激光稳定性好 ，对PH 值不敏感，具有水溶性。（如Alexa Fluor488 与 FITC 检测通道相同，但是强度和淬灭时间上，前者 明显强于后者 ） ◆多色荧光搭配的原则 多色分析方案中荧光抗体的选择和搭配，会受到很多因素的制约，是一个难点： ① 每个检测通道只能选择 1 种荧光素，各通道之间的荧光素可以随意搭配 （如FL1 选择了 FITC 标记 的抗体，就不能再选择 Alexa Fluor488 标记的抗体；而同组实验的其余抗体选择 PE 或者 APC 标 记，都是可以随意组合的）； ② 所选各种荧光素光谱的重叠应当尽量减少，否则将会导致补偿难调。例如 ，PE-cy5 与 APC 同时标 记，将会导致补偿过度，需换成 PE-cy5.5 或 Percp-cy5.5。最常用的4 色荧光搭配是：FITC、PE、 Percp-cy5.5、APC ； ③ 多色分析往往会因个别抗体荧光素种类极少而受到限制，需要同时参考多家抗体公司的产品进行方 案设计。因此如遇 5 色以上分析需求，建议咨询福麦斯生物专业销售人员。 ◆抗体剂量