朊蛋白在奶牛生殖系统地定位表达.pdfVIP

朊蛋白在奶牛生殖系统表达的定位1 张太翔，赵德明 中国农业大学国家动物海绵状脑病实验室，北京（100094 ） E-mail：zhaodm@ 摘 要：用免疫组织化学的方法对奶牛生殖系统中朊蛋白进行定位研究，结果表明：在雌奶 牛的卵巢，子宫阜，子宫呈现阳性，输卵管呈弱阳性。雄奶牛的睾丸，附睾呈现弱阳性，其 他器官为阴性。这说明了在这些组织中有正常的PrP 的存在，为探索Prion 致病机理、感染 途径提供基础数据，也为朊病毒是否可以垂直传播提供了基础数据。 关键词：BSE ，朊蛋白，奶牛生殖系统，免疫组织化学 中图分类号：S588.9 引言 传染性海绵状脑病（TSEs ）是一种可引起人和动物一系列神经退化性疾病的一种新型 传染病,包括羊瘙痒病(Scrapie)、牛海绵状脑病(BSE)、鹿的慢性消耗性疾病（CWD ），水貂 海绵状脑病（MSE ），猫的疯猫病（FSE ），人克雅氏病(CJD)[1,2] 。TSEs 疾病起始于正常的 PrPc 发生错误折叠，形成富含β片层的、抗蛋白酶水解的PrPsc 。人们已经认识到PrPc 向PrPsc 转化是疾病发生和发展的关键。错误折叠的PrPsc 有很强的聚合倾向,先形成淀粉样的小纤维, 进一步聚合形成淀粉样斑块,最后发展为可被临床诊断的大脑海绵状退化变性病症[3,4] 。 疯牛病（BSE ）是由于机体正常PrPC 转化为异常的，具有蛋白酶K 抗性的PrP （PrPSC ）。 具体的转化机理还不清楚。目前认为PrPSc 可能的传染过程是：少量PrPSc 与细胞PrPc 结 合后，以PrPSc 为模板，使PrPc 发生明显构象改变而转变为PrPSc，从而达到PrPSc 传染扩 增的目的，最后使PrPc 全部转变成不溶性的PrPSc，脑组织形成淀粉样斑块直至死亡[5,6] 。 PrPc 在体内的分布很广泛，在中枢神经系统和外周神经系统中含量很高，在免疫系统中 也有分布。有报道称朊病毒可以通过口服，接触，静脉注射，脑内注射等方式感染[9,10]，但 是没有有关朊病毒垂直传播的报道。为了研究朊病毒是否能够垂直传播，我们利用正常的奶 牛生殖系统，用免疫组织化学的方法研究正常朊蛋白的分布，为以后研究朊病毒的垂直传播 提供基础数据。 1. 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物：奶牛生殖系统采自屠宰场，母畜包括：卵巢，输卵管，子宫，子宫阜，阴 道；公畜包括：睾丸，附睾，输精管，精囊腺，前列腺，尿道球腺，阴茎 1.1.2 试剂：二步法免疫组化检测试剂盒，PV9000, 北京中杉金桥生物技术有限公司； 浓缩性DAB (3，3-二氨基联苯胺) 试剂盒，DAB Kit ，ZLI-9032 ，北京中杉金桥生物技术有 限公司；液体AEC (3-氨基-9-乙基咔唑) 酶底物试剂盒，ZLI-9036 ，北京中杉金桥生物技术 有限公司；PrP 单克隆抗体： AH6 ，英国；辣根酶标记山羊抗小鼠IgG （H+L ）, ZB2305, 北 京中杉金桥生物技术有限公司；粘片剂：APES (3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷)，北京中杉金桥 生物技术有限公司；其它试剂均为国产分析纯。 1本课题得到国家自然基金（No）和教育部博士点基金（No.20020019006 ）资助项目 的资助。 -1- 1.2 方法 1.2.1 组织的处理。采集的组织用10％的福尔马林固定，脱水（依次进入70%、85%、95%、 100%、100%酒精），透明（依次放入1：1 的二甲苯酒精、纯二甲苯中，分别为30 分钟）， 透蜡和包埋（依次放入60℃的蜡盘Ⅰ、Ⅱ内，各30 分钟，包埋蜡盘温度设定为65℃），切 片,厚度为5 um，展片、贴片和烤片。分成两部分，一部分用常规的HE 染色，一部分不染 色以备免疫组织化学使用。 1.2.2 免疫组织化学 DAB 浓缩液及稀释液：北京中杉金桥生物技术有限公司 操作步骤 1）切片二甲苯脱蜡，经系列酒精入