ICSI技术挽救GFP兔及介导家兔转基因的研究.pdf

0225 UIliversi够Code：l Code：S14636 RegiSter 、、嘲 ～ Dissertationforthe ofMaster Degree on SaVe ICSI GFPRabbitsand Study Medi却ed rn ’ lranSgenlC ‘．， Candidate： ZhouXiaomei Supen噎sor： ProfLi Heping LiShaIlg肌g Academic for： Master Deg他eApplied Animal and geneticsbreeding SpeciaIi蚵： reproduction te Daofo阳lExamjnation： June，2014 UniVers时： Nonheast ForeSt叫University 万方数据 摘要 摘要 目的探索电刺激家兔卵母细胞对ICSI过程卵的激活和胚胎发育效果的影响，检验 从死亡G即兔获得精子通过ICSI方法能否生产整期发育的家兔，并对碱处理精子进行 家兔ICSI介导转基因进行初步研究。方法精子从死亡大约5小时后的杂合子G矸，公 超数排卵，收集14—15小时的卵母细胞。采用显微单精子注射技术，把精子注入卵母细 胞卵质。在IcSI操作之前或之后卵的激活采用直流电动脉冲程序。ICsI后，受精卵在 NaOH B2液培养4天或在2—4细胞时期移植到受体的输卵管内。此外，实验采用10mM 碱处理家兔精子使精予破膜后，与外源基因共同孵育，然后通过ICSI技术导入卵母细 胞。实验另设无碱处理无质粒孵育组和碱处理后精子无质粒孵育空白组，观察并比较胚 胎的发育情况。结果ICSI前一次电击组和前两次电击组囊胚率没有显著性差异(34％vS 37％)，但这两组囊胚率显著高于其他组，而且ICSI前一次电击组平均23％的囊胚表达 GFP荧光一远远超过其他组。在这两个IcsI空白对照组，注射前两次电击组卵的孤雌发 VS 育更高(40 0％，尸0．05)。同时，注射前～次电击加注射后