亲环素A对猪乙型脑炎病毒复制的影响.pdfVIP

删O删O12 7必4 ．J 8， 摘要 蛋白折叠、炎症应答以及介导细胞信号传导等功能。随着对CypA研究的不断深 入，发现越来越多的疾病与CypA的表达有关，近年来关于CypA对病毒复制的相关 作用的研究也越来越多。本实验重点研究猪亲环素A在猪乙型脑炎病毒(JEV)复 制过程中的作用，就猪CypA对JEV复制的影响进行以下研究。 1．猪CypA的真核表达载体的构建及猪流行性乙型脑炎病毒实时荧光定量检测方法 的建立 vector，然后以 CypA重组载体上克隆猪CypA基因并连接至pMDl9一TSimple E的基因 果显示，猪CypA基因插入方向与位点完全正确。根据GenBank上猪JEV 序列，设计一对猪JEVE基因的特异性扩增引物进行JEVE基因的扩增，并将扩增 所得产物连接至PMDl9．T载体，作为标准品构建JEV荧光定量标准曲线，并做特异 性、灵敏性和重复性试验。结果表明其特异性、灵敏性和重复性均较好，JEV阳性 样品扩增得到“S”型曲线，可检测最低模版浓度为6copies／l_tL。 2．重组pcDNA3．1-CypA对JEV复制的影响 参照去内毒素质粒提取试剂盒方法，提取真核表达质粒pcDNA3．1．CypA和空载 组。利用Westen 同时间点的感染细胞和上清。用JEV实时荧光定量检测方法检测样品中JEV含量， 染组，细胞内JEV生长规律与对照组相似，三组细胞内病毒一步生长曲线变化无明 万方数据 照组无明显差异。 3．CypA蛋白对猪乙型脑炎病毒复制的影响 养进行培养，并收集不同时间点的上清和感染细胞，以JEV荧光定量检测法分析不 同样品中病毒RNA含量并绘制生长曲线。结果显示添加不同浓度猪CypA蛋白组细 胞内JEV含量与对照组无明显差异。添加不同浓度猪CypA蛋白组细胞外JEV含量 存在较大差异。添加不同浓度猪CypA蛋白处理的三个组，JEV一步生长曲线规律与 蛋白的三个组病毒RNA含量均高于对照组，在对数生长期，添加猪CypA蛋白以后 6h后，病毒 JEV增殖速度比对照组快，0．3mg／mL与O．5mg／mL两个处理组在感染1 量均高于0．3mg／mL与0．1mg／mL组。 关键词：猪流行性乙型脑炎病毒；亲环素A；真核表达；原核表达；荧光定量PCR 万方数据 ABSTRACT ofthe an20 membercyclophilinsfamily，is CyclophilinA(CypA)，theprototypical kDa firstdiscovered carlintermediatecell partnerprotein．As cyclophilin，CypA signaling， involvein andthe andSOon．Withthe of proteinfolding inflammatoryresponse studying foundthatthe of relatedwithanumberof studies CypA expressionCypA