人淀粉样蛋白前体695基因与人烟碱乙酰胆碱受体α4β2亚单位基因共表达细胞模型的构建お.pdfVIP

中国药理学与毒理学杂志 ２００８年２月； ２２（１）：７３－７６ 　　 　 ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ ２００８　　Ｆｅｂ； ２２（１）：７３－７６ ·７３· 人淀粉样蛋白前体６９５基因及人烟碱乙酰胆碱受体 ４２亚单位基因共表达细胞模型的构建 αβ 聂惠贞，李佐青，沈颖华，黄 旭，王　鑫，韩燕飞，殷　明 （上海交通大学药学院，上海　２００２４０） 摘要：目的　为满足寻找可能影响淀粉样 蛋白 是经 分泌酶作用，产生分泌型的ＡＰＰ（ｓＡＰＰ），具 β α （Ａ ）在阿尔茨海默病过程中的药物实验的需求， 有神经营养、促神经细胞发育等神经细胞保护作用。 β 建立共表达人淀粉样蛋白前体（ＡＰＰ）６９５基因和烟 另外一条水解途径是经过 和 分泌酶水解剪切 β γ 碱乙酰胆碱受体（ｎＡＣｈＲ）４２亚单位基因的细胞 ［１］ αβ 形成淀粉样 蛋白（ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ，Ａ ） 。阿 β β β 模型。方法　用脂质体转染方法把ＡＰＰ６９５基因转 尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ′ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）的Ａ 学说认 β 染进 已稳定转染 ｎＡＣｈＲ ４２亚单位基 因的 αβ 为，病理状态下脑内Ａ 片段Ａ 及Ａ 产生 β β β １－４０ １－４２ －１ ＳＨＥＰ１细胞。用５００ｍｇ·Ｌ Ｇ４１８加压筛选，并挑 增加形成寡聚体，进而形成斑块，对神经元产生多方 选细胞单克隆。用ＲＴＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ蛋白印迹法 面的毒性作用，表现为ＡＤ的一系列症状［２－３］。 对转染后的细胞单克隆进行鉴定，挑取成功转染并 神经元烟碱型乙酰胆碱受体（ｎｉｃｏｔｉｎｉｃａｃｅｔｙｌｃｈｏ 高表达ＡＰＰ６９５的细胞进行克隆。膜片钳检测所挑 ｌｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｎＡＣｈＲ）为配体门控性离子通道受体， 细胞克隆的 ４２受体功能。结果　挑出成功稳定 αβ 在肌肉和神经系统广泛表达多种亚型，在中枢神经系 转染人ＡＰＰ６９５基因及人ｎＡＣｈＲ ４２亚单位基因 ［４］ αβ 统以 ４２亚型表达最为广泛 。近年来关于神经 αβ 的共表达细胞克隆株。膜片钳方法检测到此细胞克 元ｎＡＣｈＲ和ＡＤ的研究提示，激动中枢ｎＡＣｈＲ可以 隆株上ｎＡＣｈＲ ４２存在活性。结论　成功制备了 αβ 减少Ａ 产生，增强认知和学习记忆功能，减缓ＡＤ的