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中国药理学与毒理学杂志 2008年2月; 22(1):73-76
ChinJPharmacolToxicol 2008 Feb; 22(1):73-76 ·73·
人淀粉样蛋白前体695基因及人烟碱乙酰胆碱受体
42亚单位基因共表达细胞模型的构建
αβ
聂惠贞,李佐青,沈颖华,黄 旭,王 鑫,韩燕飞,殷 明
(上海交通大学药学院,上海 200240)
摘要:目的 为满足寻找可能影响淀粉样 蛋白 是经 分泌酶作用,产生分泌型的APP(sAPP),具
β α
(A )在阿尔茨海默病过程中的药物实验的需求, 有神经营养、促神经细胞发育等神经细胞保护作用。
β
建立共表达人淀粉样蛋白前体(APP)695基因和烟 另外一条水解途径是经过 和 分泌酶水解剪切
β γ
碱乙酰胆碱受体(nAChR)42亚单位基因的细胞 [1]
αβ 形成淀粉样 蛋白(amyloid protein,A ) 。阿
β β β
模型。方法 用脂质体转染方法把APP695基因转 尔茨海默病(Alzheimer′sdisease,AD)的A 学说认
β
染进 已稳定转染 nAChR 42亚单位基 因的
αβ 为,病理状态下脑内A 片段A 及A 产生
β β β
1-40 1-42
-1
SHEP1细胞。用500mg·L G418加压筛选,并挑 增加形成寡聚体,进而形成斑块,对神经元产生多方
选细胞单克隆。用RTPCR和Western蛋白印迹法 面的毒性作用,表现为AD的一系列症状[2-3]。
对转染后的细胞单克隆进行鉴定,挑取成功转染并 神经元烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinicacetylcho
高表达APP695的细胞进行克隆。膜片钳检测所挑 linereceptor,nAChR)为配体门控性离子通道受体,
细胞克隆的 42受体功能。结果 挑出成功稳定
αβ 在肌肉和神经系统广泛表达多种亚型,在中枢神经系
转染人APP695基因及人nAChR 42亚单位基因 [4]
αβ 统以 42亚型表达最为广泛 。近年来关于神经
αβ
的共表达细胞克隆株。膜片钳方法检测到此细胞克 元nAChR和AD的研究提示,激动中枢nAChR可以
隆株上nAChR 42存在活性。结论 成功制备了
αβ 减少A 产生,增强认知和学习记忆功能,减缓AD的
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