人淀粉样蛋白前体695基因与人烟碱乙酰胆碱受体α4β2亚单位基因共表达细胞模型的构建お.pdfVIP

人淀粉样蛋白前体695基因与人烟碱乙酰胆碱受体α4β2亚单位基因共表达细胞模型的构建お.pdf

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中国药理学与毒理学杂志 2008年2月; 22(1):73-76      ChinJPharmacolToxicol 2008  Feb; 22(1):73-76 ·73· 人淀粉样蛋白前体695基因及人烟碱乙酰胆碱受体 42亚单位基因共表达细胞模型的构建 αβ 聂惠贞,李佐青,沈颖华,黄 旭,王 鑫,韩燕飞,殷 明 (上海交通大学药学院,上海 200240) 摘要:目的 为满足寻找可能影响淀粉样 蛋白 是经 分泌酶作用,产生分泌型的APP(sAPP),具 β α (A )在阿尔茨海默病过程中的药物实验的需求, 有神经营养、促神经细胞发育等神经细胞保护作用。 β 建立共表达人淀粉样蛋白前体(APP)695基因和烟 另外一条水解途径是经过 和 分泌酶水解剪切 β γ 碱乙酰胆碱受体(nAChR)42亚单位基因的细胞 [1] αβ 形成淀粉样 蛋白(amyloid protein,A ) 。阿 β β β 模型。方法 用脂质体转染方法把APP695基因转 尔茨海默病(Alzheimer′sdisease,AD)的A 学说认 β 染进 已稳定转染 nAChR 42亚单位基 因的 αβ 为,病理状态下脑内A 片段A 及A 产生 β β β 1-40 1-42 -1 SHEP1细胞。用500mg·L G418加压筛选,并挑 增加形成寡聚体,进而形成斑块,对神经元产生多方 选细胞单克隆。用RTPCR和Western蛋白印迹法 面的毒性作用,表现为AD的一系列症状[2-3]。 对转染后的细胞单克隆进行鉴定,挑取成功转染并 神经元烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinicacetylcho 高表达APP695的细胞进行克隆。膜片钳检测所挑 linereceptor,nAChR)为配体门控性离子通道受体, 细胞克隆的 42受体功能。结果 挑出成功稳定 αβ 在肌肉和神经系统广泛表达多种亚型,在中枢神经系 转染人APP695基因及人nAChR 42亚单位基因 [4] αβ 统以 42亚型表达最为广泛 。近年来关于神经 αβ 的共表达细胞克隆株。膜片钳方法检测到此细胞克 元nAChR和AD的研究提示,激动中枢nAChR可以 隆株上nAChR 42存在活性。结论 成功制备了 αβ 减少A 产生,增强认知和学习记忆功能,减缓AD的

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